《名胜古迹人体外周血淋巴细胞培养与染色体制备》由会员分享，可在线阅读，更多相关《名胜古迹人体外周血淋巴细胞培养与染色体制备（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、金华市金兰水库除险加固工程监理实施细则人体外周血淋巴细胞培养与染色体制备适用对象 生物工程专业实验学时 6学时一、实验目的1、了解动物细胞培养的方法。2、掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。二、实验原理所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，
2、转变成可分裂的转化细胞。向标本。三、仪器设备显微镜，离心机，水浴箱，温箱，锥形离心管，毛细滴管，量简，烧杯，培养瓶，冷湿载玻片，玻片架，注射器，碘酒和酒精棉球，酒精灯，定时钟，天平。 四、相关知识点（一）细胞培养技术1、在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。由于体外培养的细胞缺乏机体抗感染功能，所以在一切操作中要努力做到最大限度的无菌，防止污染。2、无菌操作的要领和要求1）培养前准备 为做好培养前用品的充分准备工作，根据实验内容的要求收集好已消毒的所需用品，清点无误后置于超净工作台内，这样可避免操作开始后由于用品不全、往反取物而增加污染机会。2
3、）超净工作台消毒 打开紫外线杀菌灯照射消毒20-30分钟，然后关闭紫外灯打开风机，流入的空气是经过除菌板过滤的空气，工作台内可保持无菌环境。为防止培养细胞和培养液等受到紫外线照射，消毒前应予先放在带盖容器内或在操作时随手携入。3）洗手 操作时因整个前臂要伸入超净工作台内，所以洗手时，一定要洗刷到肘部，然后用0.2% 新洁尔灭擦洗或用75%酒精棉球擦试。4）火焰消毒 在超净工作台无菌环境中操作时，首先要点燃酒精灯，此后一切操作如安装吸管橡皮头、打开或加盖瓶塞、使用吸管等都要经过火焰烧灼，或在近火焰处进行。注意金属器械不能在火焰上烧灼时间过长。烧过的用具都要待冷却后再接触细胞，否则会烧焦形成炭膜，
4、再用时会把有害物质带入培养液中。5）操作 进行培养操作时动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动增加污染机会。不能用手触及器皿的消毒部分。如已接触，要用火焰烧灼消毒或更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理布局。原则上是右手使用方便的用品放在右侧，左手使用方便的用品放在左侧；酒精灯置于中央。培养液等不要过早开瓶，打开的培养液和培养用瓶等应保持斜位或平放，长时间开口直立，易增加落菌机会。吸取各种用液时均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或增加混淆不同细胞的机会。（二）染色体染色体是生物细胞中的一个重要的组成部分，每一物种都有一定数目及一定形态结构的染色体。染色体能通过细胞分裂而复制。并且
5、在世代相传的过程中具有稳定地保持形态、结构和功能的特征。染色体是遗传物质的载体。人类99%的遗传物质位于染色体上。染色体数目、结构的改变将导致染色体病。五、实验步骤（一）采血与培养:用碘酒，酒精常规消毒后，采取静脉血1m1.分别注入装有5ml培养液的二个培养瓶中，每瓶接种血液0.5m1，加入PHA(每ml培养基内100200 g)，轻轻摇匀后置入37温箱内培养。（二）秋水仙素处理: 培养至6872小时，加入秋水仙素使用液0.05m1(最终浓度0.04 g / m1)继续培养46小时。（三）标本的制备: 1、终止培养后，将培养物混匀，倒人锥形离心管内，离心沉淀8分钟(2000r/min)，弃去上
6、清液。2、加入37预温的低渗液8m1，轻轻打匀，置37水浴箱中1520分钟。 3、低渗处理完毕后，直接加入新配的固定液1 m1进行预固定，混匀后，离心8分钟(1500r/min)。 4、弃去上清液，沿离心管壁缓慢加入固定液6m1，轻轻吹打混匀，置室温15分钟。5、离心沉淀1500 r/min，6分钟。6、弃去上情液，再加入固定液6m1，固定10分钟。7、离心沉淀1500 r/min，6分钟。8、尽量吸净上清液，视管底剩下的细胞多少加入适量固定液(0.30.5m1)，轻轻吹打成细胞悬液。9、滴片：取保存在冰水中的冷湿载玻片1张，稍倾斜，用毛细滴管吸取细胞悬液，从1尺高处滴23滴于玻片上，立即用口
7、对准玻片吹气，使细胞在玻片上散开，然后在酒精灯上略烘一下(勿全烘干)，在空气中待干。（四）染色：用Giemsa染色液染色510分钟，水洗，待干后即可镜检。六、实验报告要求结构完整 、条理分明、文字简练、书写工整、措辞注意科学性和逻辑性、正确使用标点符号。实验报告内容包括：姓班级、组别、日期、室温；实验题目；实验目的；实验用器材、药品；实验方法；实验结果；讨论和结论。七、思考题如何才能制得高质量的染色体标本？八、实验成绩评定办法参考教学实验室制订的有关考核方法。根据实验的具体内容，视操作的完成质量、实验报告的完成情况分别给予评价，可分为A、B、C、D几个等级。主要评分点：原理描述、实验流程、调试
8、过程、数据记录、解决问题的能力、资料搜集、实验结果、实验效果等。牛奶要怎样喝才更营养更健康牛奶要怎样喝才更营养更健康 众所周知牛奶的营养成分很高，矿物质含量也很丰富，最难得的是，牛奶是人体钙的最佳来源，而且钙磷比例非常适当，利于钙的吸收。 1、每人每天喝多少牛奶好？ 牛奶作为一种营养价值较高的食品，喝少了难以发挥应有的作用，喝多了则难以消化吸收，所以大家应根据年龄、体力和脑力的消耗量以及自身经济条件来确定每天的饮奶量。一般来说，成年人一天应喝400500毫升，即两瓶牛奶，建议至少要喝250毫升，即一瓶牛奶。经济条件许可最好三瓶即750毫升左右，但不宜超过1000毫升。简单地说，就是“保证一瓶，
9、争取二瓶，最好三瓶，不超四瓶”。 2、什么时候喝牛奶好？ 牛奶是一种基础食品，以饭后饮用为宜。一天一瓶以早餐喝为好，一天两瓶以早晚喝为佳，也可根据个人生活习惯在三餐之外的时间喝，但要注意先吃点富含淀粉的食物后再喝，以使牛奶在胃中有较长的停留时间，有利于营养素的全面吸收和利用。简单地理解，就是“早中晚都行，最好饭后饮”。 3、喝牛奶对胃有保护作用吗？ 由于牛奶可以在胃黏膜表面形成良好的保护层，所以它可缓解酒精等刺激性食物对胃黏膜的侵蚀，减少胃部疾病的发生。日本早已有喝奶人群胃癌发病率较低的研究报道。相反，饮酒尤其是酗酒会增加内脏器官的负担，诱发或加重胃部疾病的发生或病变。因此，我们还是倡议“多喝
10、奶、少喝酒，最好以奶代酒”。 4、鲜奶与奶粉哪样更好？ 奶粉是鲜奶经过浓缩、喷雾、干燥后制成的微细粉粒，其蛋白质、脂肪、无机盐等主要营养成分变化不大，但氨基酸的利用率有所下降，部分维生素和免疫球蛋白等活性物质遭到破坏，尤其是维生素C、B1破坏严重。因此，有条件的情况下，以喝鲜奶更好。但奶粉便于储存、运输、携带，对于野外工作者、偏僻和缺乏冷藏设备的农村居民仍是较好的营养食品。值得一提的是，“奶粉事件”以后，广大消费者选购奶粉时要选择质量信誉度好的品牌和厂家，谨防假冒伪劣产品。牛奶要怎样喝才更营养更健康牛奶要怎样喝才更营养更健康 众所周知牛奶的营养成分很高，矿物质含量也很丰富，最难得的是，牛奶是人
11、体钙的最佳来源，而且钙磷比例非常适当，利于钙的吸收。 1、每人每天喝多少牛奶好？ 牛奶作为一种营养价值较高的食品，喝少了难以发挥应有的作用，喝多了则难以消化吸收，所以大家应根据年龄、体力和脑力的消耗量以及自身经济条件来确定每天的饮奶量。一般来说，成年人一天应喝400500毫升，即两瓶牛奶，建议至少要喝250毫升，即一瓶牛奶。经济条件许可最好三瓶即750毫升左右，但不宜超过1000毫升。简单地说，就是“保证一瓶，争取二瓶，最好三瓶，不超四瓶”。 2、什么时候喝牛奶好？ 牛奶是一种基础食品，以饭后饮用为宜。一天一瓶以早餐喝为好，一天两瓶以早晚喝为佳，也可根据个人生活习惯在三餐之外的时间喝，但要注意
12、先吃点富含淀粉的食物后再喝，以使牛奶在胃中有较长的停留时间，有利于营养素的全面吸收和利用。简单地理解，就是“早中晚都行，最好饭后饮”。 3、喝牛奶对胃有保护作用吗？ 由于牛奶可以在胃黏膜表面形成良好的保护层，所以它可缓解酒精等刺激性食物对胃黏膜的侵蚀，减少胃部疾病的发生。日本早已有喝奶人群胃癌发病率较低的研究报道。相反，饮酒尤其是酗酒会增加内脏器官的负担，诱发或加重胃部疾病的发生或病变。因此，我们还是倡议“多喝奶、少喝酒，最好以奶代酒”。 4、鲜奶与奶粉哪样更好？ 奶粉是鲜奶经过浓缩、喷雾、干燥后制成的微细粉粒，其蛋白质、脂肪、无机盐等主要营养成分变化不大，但氨基酸的利用率有所下降，部分维生素
13、和免疫球蛋白等活性物质遭到破坏，尤其是维生素C、B1破坏严重。因此，有条件的情况下，以喝鲜奶更好。但奶粉便于储存、运输、携带，对于野外工作者、偏僻和缺乏冷藏设备的农村居民仍是较好的营养食品。值得一提的是，“奶粉事件”以后，广大消费者选购奶粉时要选择质量信誉度好的品牌和厂家，谨防假冒伪劣产品。一、积累与运用：1用诗词原句填空。（每题1分，共6分） 几处早莺争暖树，。（白居易钱塘湖春行） ，西北望，射天狼。（苏轼江城子密州出猎） 酬乐天扬州初逢席上见赠一诗中蕴含新事物必将取代旧事物这一哲理的句子是：，。 ，各领风骚数百年。（赵冀论诗） 王安石在登飞来峰中表达为实现自己的政治抱负而勇往直前、无所畏惧
14、的进取精神的诗句是，。 我们即将跨入新的学习阶段，应该对未来充满希望，具有挂起风帆、直渡大海的精神，让我们用李白行路难里的两句共勉：，。 2、语文实践活动可以培养综合能力。请你参加下面的活动，并根据情境和要求答题。(4分) 育英中学准备在九年级学生中举行一次“诗歌朗诵”交流展示活动，要求参与者自己选择一首最喜爱的诗歌当众朗诵展示。 (1)假如你是本次活动的主持人，请你设计一段开场白。(不超过80字)(2分) (2)你班李明同学朗诵很好，但他性格内向，不好意思当众朗诵，请你用简洁的语言劝说他参加这次活动。(30-50字)(2分) 3.请你从读过的文学名著中推荐一位令自己感动的英雄人物，并写出故事情节和给同学的推荐理由。（2分） 书名：人物姓名： 人物介绍：
