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1、从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA一实验目的1、了解从细胞中提取DNA的基本原理2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA的基本操作步骤和会影响提取效 果的注意事项。二实验原理1. 用蛋白酶K （使膜上蛋白变性分解）和去污剂SDS （破坏细胞膜的脂质结 构）共同消化细胞。2. 然后酚、氯仿等有机溶剂进行抽提，进行DNA的纯化，去掉蛋白质、RNA、 多糖等生物大分子。3. 最后用无水乙醇沉淀DNA，干燥后用TE溶解，在4C下可保存一年。三实验步骤1、先用清水漱口。然后用舌头舔颊粘膜上颚、用牙刮颊部，嘬咀，用分泌出 的唾液反复漱口；将唾液吐到杯中。用1ml生理盐水洗涤，后将1.5ml液体转入 1
2、个干净的EP管中，2O0Orpm离心5分钟，倒掉上清。2、重复用1.0ml生理盐水洗涤沉淀1次，离心，去上清。3、沉淀中加5001 1x细胞裂解液（STE）,打散细胞团、混匀，再加15ul 20mg/ml蛋白酶K,充分混匀。55C水浴30min。4、加500 u I饱和酚，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。5、上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）移至另一加 入装有500 u l氯仿的EP管，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。6、吸取400 u l上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相） 至已装有900 u l预冷无水乙醇的离心管，混合均匀，可
3、见白色絮状沉淀， 10000rpm离心5min， DNA沉淀在管底。7、去上清，加入70%乙醇1ml清洗沉淀，10000rpm离心5min，去上清（尽 量用小枪头将液体去干净，但注意不要将沉淀也吸走），室温干燥5min，再用50 U l TE buffer溶解沉淀，4C储藏备用。四实验结果五结果分析96M9799 | 100 1曲IDS 107 M2015-1022编号：100如图所示，100号几乎没有提取出DNA,只有很弱的一条带，如果量再多一 些的话，应该也看得到会有几条带。经过分析后认为主要以下几点原因：【1】.唾液稀释过度，导致取到的细胞 很少。【2】.在破碎细胞的时候进行的不彻底，没
4、有混匀，导致DNA抽提不完全。【3】.加入活性去污剂到加热30min的间隔有些长导致部分DNA被DNA水解酶 降解。【4】.加入饱和酚的时候没有摇匀，蛋白质的去除不彻底，部分DNA与蛋 白质结合，在分离DNA去除蛋白质的时候损失了不少DNA。此外，不同的条带代表提取出的DNA的大小不同，在实验过程中，可能由于 剧烈震荡，或DNA水解酶的缘故使得DNA链被打断。因此出现了不同的几个条 带。六注意事项1. 取唾液时既不能过分稀释，也不能太粘稠，发现细胞不足时要及时补充。2. 裂解细胞的时候，要充分混匀活性去污剂，但震荡也不能太剧烈。最好及 时放入水域锅中加热。3. 加苯酚后要充分混匀，之后离心，尽可能多的将上清吸出，但注意不要取 到中间的蛋白质。4. 在最后用70%的乙醇清洗DNA后要尽可能多的把上清吸走。5. 提取到的DNA要用TE buffer保存。
