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1、Q/ 1.82005中国水产科学研究院 发布-实施-发布水产种质资源收集、整理、保存技术规程标 本Q/CAF 2002 00012005Q/CAF中国水产科学研究院企业标准ICSB501水产种质资源标准化整理、整合与共享 Q/CAF 2002 00012005前 言本部分为水产种质资源收集、整理、保存技术规程标本部分。本部分的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E、附录F、附录G、附录H和附录I为规范性附录。本部分由平台建设项目组提出。本部分由中国水产科学研究院科技处归口。本部分起草单位： 中国水产科学研究院东海水产研究所、南海水产研究所本部分主要起草人: 庄平、江世贵、李圣法、邓思明、胡芬I
2、引 言水生生物标本系重要的种质资源，调查期间所采获的新种和罕见稀物种，更是国家的宝贵财富，馆藏标本是否相对齐全，发现的新物种以及珍稀种类馆藏数，往往反映出该单位科研基础水平和成果，对外来说也是我国国力的展示。为此在调查研究时，应重视对各门类生物样品的采集，并按专业分工进行搜集、处理和保存。II水产种质资源标本收集、整理、保存技术规程 1 范围本部分规定了水生生物标本采集、整理、保存的方法和技术要求。本部分适用于我国水生生物标本的收集、整理和保存。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本
3、标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。海洋调查规范。国家技术监督局，1991。海洋生物资源与环境调查规范，164p。我国专属经济区和大陆架勘测专项生物资源调查项目技术专家组，1997。关于水生动物濒危等级标准的探讨。邓思明，现代渔业信息，1997（2）：13。3 标本的采集3.1 采集工具和试剂 采集工具和用具在采集时为了尽量避免标本的损伤，应配备以下工具和用具： 渔网和钓具（捕捞或钓取鱼类、虾类、蟹类和贝类） 浮游生物网（收集浮游藻类、浮游动物及其它浮游生物） 铁锨（挖取栖息在泥沙中的动物）； 镊子（采集栖息
4、在浅层泥沙中的贝类）； 凿子（采集栖息在岩石或岩石缝隙内的动物，如牡蛎等）； 冰瓶、广口瓶（玻璃或塑料）、聚乙烯袋等（保存样品）； 一次性乳胶手套、纱布； 记录本、记号笔等。 试剂用于采集标本的固定和保存，采集标本时应备有下试剂: 70酒精（取市售 95的酒精 70mL，加 25mL蒸馏水）； 5福尔马林（取市售 40的甲醛水溶液5mL，加入95 mL蒸馏水）；3.2 采集方法 藻类浮游藻类可用浮游生物网采集，将采到的浮游藻类聚于网头后注入标本瓶中。如果是附生或附着藻类，可用采集刀或小铲刮取，也可用镊子直接取样。调查时应按站次、网具类型，分别装瓶带回，每瓶需编号、填写海上采样记录表（见附录A）
5、。 底栖生物3.1 采泥和拖网取样。一些底栖贝类可用铁锨挖取，用水把贝体冲洗干净，如果壳上有附着物，应用不锈钢刀或比较硬的毛刷剥掉，彼此相连的个体可用不锈钢小刀分开。样品应按类别、个体大小、柔软脆弱和坚硬带刺者分别装瓶。3.2.2.2 定量采泥样品应全部装瓶带回。3.3 定性拖网所获样品、过大时可取总重量一小部分称重，计算每个种的个体数，经换算得到总个体数。数量多的种类可选取不少于15尾带回，罕见种则应全部带回。3.4 发现具有典型生态意义的标本、应拍照、观察并作记录。3.5 填写标签和采集记录：已装瓶的样品均需投入标签（见附录B），放入标本桶的样品，应先用纱布包装，并加一个标签（用不退色而牢
6、固的材料）。填写采集记录表（见附录C和附录D）。3. 自游生物（鱼、虾、蟹等）.1 使用网具或钓具收集。收网、收钓时要小心起捕，尽量不要损伤鱼体的鳍和鳞片以便能制作完整的标本，特别注意避免虾的触须和步足的损伤。3.2.3.2 每网出现的种类，均应填写拖网记录表（见附录E）。3.2.3.3 在分离渔获样品时，凡出现的种类均应留作标本，其中数量较多的经济种和常见种，可选取具代表性样品不少于15尾作样品。.4 出现的罕见种均应全部留作标本。所有样品应分站装箱编号带回。.5 在分离渔获样品时如发现具典型生态意义的样品，可进行拍照，并观察记录其身体各部色彩和花纹等性状。4标本的整理 常用药品及配制 甲醛
7、溶液（市售甲醛浓度为37%40%）：一般用10%的浓度（即1份40%甲醛加9份水）作为标本的固定液，5%的浓度作标本的保存液。 酒精（乙醇C2H5OH）：一般用70%80%酒精固定和保存。 中性甲醛溶液：5%（V/V）甲醛溶液加水四硼酸纳或六亚甲基四胺。 丙三醇乙醇溶液：75%（V/V）乙醇加50%（V/V）丙三醇等量混合。 甲醛乙醇混合液：2%（V/V）甲醛溶液与5%（V/V）乙醇等量混合。 波思（Bouinn）氏固定液：三硝基苯酚（苦味酸）饱和溶液75cm3，甲醛溶液25cm3，冰醋酸5cm3。 麻醉剂：常用的有薄荷脑结晶，水合氯醛结晶，硫酸镁和氯化镁溶液（MgCl2）750 g/dm3。
8、 染色剂：1 g四氯四碘荧光素溶于1 dm310 %（V/V）的甲醛溶液。 整理程序一般应及时在药品固定后装入容器中保存。但有些动物类群不能直接放入固定液中，而应先进行麻醉处理后固定，以避免动物体因刺激而发生变形或产生自切现象。标本整理和保存程序见图1。标本分离（依不同种类、个体大小、体质的柔软脆弱）冲洗（去除体表、口、鳃腔污泥和粘液）培养和麻醉（如海葵、海仙人掌、纽形动物、头足类、后鳃类、海参和蛇尾类等）固定和保存（多数动物在福尔马林液中固定和保存，但某些软体动物、甲壳类、棘皮、海绵、海鸡冠、水螅等动物必须用酒精固定和保存）装瓶和登记（标本编号，加标签，登记和记录）采集调查记录表（见附录F）
9、 图1 标本整理和保存程序图4.3 常见水产动物各类标本的整理与制作 鱼类标本.1 先用清水洗净粘附在鱼体上的泥沙和粘液等污物，并从口腔冲水以去除口腔内和鳃上的污物和粘液，对粘液丰富的鱼类如鳗鲡、黄鳝和黄颡鱼等可用软刷自头至尾反复洗刷几次以除去粘液，处理标本时动作要轻，避免鳞片脱落或鳍条损坏。.2 标本体形矫正：将鱼体平置于固定液为5 %10 %的福尔马林溶液或75%的酒精中，然后将各垂直鳍张开。一般需固定数日，等鱼体稍硬直后再移入5 %10 %的福尔马林溶液或75 %的酒精中保存。对体形较大的标本在固定前应先用10 % 或浓度略高的福尔马林溶液作腹腔注射，从腹鳍基部处注射以固定其内脏器官。注
10、射量以腹部变得稍硬为适度。有些大标本还需在背部肌肉处作适量注射。.3 标本鳍条的处理。如标本的鳍条挤在一起则可在浸泡前在鳍下衬垫一些棉花，用镊子将鳍条拨至自然状态，再在鳍上喷洒浓福尔马林溶液使鳍膜固定，较大的标本则需固定4 d5 d，较小的标本需1 d2 d，经固定后的标本即可包装待运或装瓶保存（如用福尔马林浸泡则要注意避光保存）。.4 某些具有辅助呼吸器官的鱼如鳗鲡、鲶鱼等在离水后仍能存活较长时间，在处理这类活标本时应先用10%福尔马林溶液作腹腔注射，再放入标本箱内，待其死后取出按常规方法处理。一些鲈形目种类如嵴塘鳢和鰕虎鱼类等最好待其自然死去后再作固定，否则会造成口部和鳃盖的极度张开，既改
11、变了外形也给以后的测量造成困难。对有些常见的淡水鱼类如鲤科中的大部分种类可将用作标本的活鱼直接放入固定液中。4.3.1.5 对某些体型较大的鱼类（如鲸鲨等），可以制成剥制标本。剥制标本的制作流程见图2。 测量与摄影：整体及局部二位的测量和摄影剥皮小型动物用95%工业用酒精浸泡1d3d。浸皮大型动物用1份明矾、2份食盐和10份水配制的溶液浸泡5d10d。制作假体涂防腐剂，缝合切口整形 图2 剥制标本制作流程图4.3.2 甲壳类标本.1 浸泡标本的制作用清水洗静后，把采集到的虾体或蟹体用5%10%的酒精麻醉，取出虾后放入70%的酒精中保存。或在10%的福尔马林中杀死、固定。然后把虾放于盛有80%的
12、酒精与10%的甘油浸制液的标本瓶内长期保存；也可置于15%的福尔马林与10%的甘油混合浸制液里封存。头足类和连虫一般个体小，可直接在75%的酒精中固定和保存。.2 干制标本.2.1 虾类用钳子压住虾体使之固定，另一只手用探针,将其脑、心及脊髓破坏,使之慢慢致死。将虾壳分离拉开，用剪刀把虾壳环节内的肌肉、内脏及内容物，全部剔除干净，再用生石灰粉填充虾壳内腔，盖紧虾壳，对虾腹部环节进行整形处理。刷上清漆，经数日自然风干后，虾体标本就可以长期保存。.2.2 蟹类先用一只手按住蟹壳使之不动，另一只手用探针缓慢刺入蟹的脑和心脏，使蟹致死。慢慢打开蟹体的头胸甲，用小勺子（可以自制）把胸部、头部的肌肉和内脏
13、挖净，仅保留蟹壳外形。用手术刀在蟹螯的活动关节处切开，小心把蟹肉挖除，用棉花把残肉和残液吸除干净，为了防止蟹体腐败，可再用药棉蘸10%甲醛溶液涂在腹壁和头胸甲的内侧，其他挖不到的地方可用注射器注入甲醛溶液。在这个过程中要防止折断触角和步足为了防止甲壳阴干后变形，可用干棉花填充蟹体内部。用大头针固定在底座上，摆正大、小触角和步足位置，阴干后涂上一层清漆，帖好标签，放置阴凉通风处即可。 贝类标本.1 浸泡标本的制作制作标本前，先在笔记本中记下活体的色泽（因为用酒精或福尔马林浸泡后容易褪色），把贝体小心冲洗干净（注意不要把壳弄破），在固定标本前，先进行麻醉，使其伸展身体。其方法可将标本置于盛满水的瓶
14、中，使其慢慢窒息而伸展身体，或缓慢加入少量硫酸镁（薄荷或多聚乙醛等药品）进行麻醉。将麻醉后的标本置入7075酒精溶液中进行固定，即可长期保存。有一些贝类个体较大，一时不易固定好，为防止腐烂，可用5福尔马林向肌肉进行注射。后鳃类动物需经过培养和麻醉：其过程是将这些动物养于新鲜海水中，俟其身体伸直而呈生活状态时，逐渐加入麻醉剂。一般在其尚未完全死去，但在受触动下，已不作反映时即可进行固定。头足类的章鱼等需用淡水麻醉，等到它们的活动能力逐渐减弱到将死亡时即可固定。螺类和双壳类一般可直接固定保存。.2 干制标本的制作有些带壳的贝类，可采用腐烂或蒸煮的方法去肉，再用镊子剔除干净，保留空壳。有厣的贝类（如螺类），必须将厣取下和壳一块保存，最好用棉花填充空壳，再把厣粘贴在壳口。4.3.4 藻类标本4.1 干制标本.1.1 工具：标本瓶，镊子，瓷盘，纱布，台纸。.1.2 制作要求：把藻类清洗干净，挑出同种植物中各器官较完备的植株，把多余、重叠的枝条进行适当修剪，避免相互遮盖，直至材料跟台纸大小相适宜。有的藻类有果实，不便压制，可剪下另行处理保存。.1.3 制作方法为：a） 压制藻类标本要用标本夹，压制时可把标本夹的一扇平放在桌子上，在上面铺上几层吸水性强的
