电融合仪操作手册

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1、Multiporator电转化仪使用说明书目录1简介 12应用范围 13安全警示 14 仪器介绍4.1包装 24.2开始4.3电击杯插槽4.4键区4.5键及键组合4.6屏幕显示4.7真核细胞和细菌/酵母的电转化 4.7.1连接外接电极（电转化/电融合）插件 4.8细胞融合（可选择）4.8.1优化细胞融合（镜下监测） 4.8.2清洗微融合杯 4.8.3螺旋融合杯4.8.4螺旋融合杯的上样及置入 4.8.5融合及细胞悬液提取 4.8.6螺旋融合杯的清洗和消毒 4.9打印连接/打印机（可选择） 5 操作模式5.1真核细胞模式5.2细菌和酵母模式（可选择） 5.3细胞融合模式（可选择） 5.3.1功能

2、：细胞排列5.3.2细胞融合步骤6错误提示7 仪器的维护7.1消毒7.2清洗8技术数据 9 订购信息#1 简介Multiporator ? 为真核细胞的电转染而设计，因为由有多种模式可选，也可进行细胞融合 实验以及细菌和酵母的电转实验。该操作手册包括该仪器的所有使用说明。Multiporator ? 的最大特点在于仪器内部可以自动计算放电曲线从而维持真核细胞电转化 和细胞融合的参数。2 应用范围 仪器的安全规则和工业的标准，仪器应用必须符合以下规定： 仅限于细胞技术领域的实验应用 应用范围包括酵母、细菌和细胞的电转化及细胞融合。 请使用 Eppendorf 的原装零配件 只能使用原始零配件。原

3、装零配件专门为保证 Multiporator ? 的最佳性能所设计，在制 造商的推荐下也可使用其他装置。因使用仪器不当或采用非制造商推荐的配置造成的 损坏， Eppendorf 不承担任何责任。3 安全警示 考虑到个人安全，必须注意下列几点！? 仔细阅读操作手册中的操作规程。 必须遵守手册中的规程！? 仅使用含有接地点的电源！? 使用 Multiporator ? 仪器之前请保证使用正确电压的电源！? 仪器应由授权的专业人员打开！仪器内可能有高压。?不要在暴露环境中拆开仪器！?不要让任何液体进入仪器或电击杯座！?该仪器仅限于体外实验使用！?仅限于仪器说明所提供范围的使用。不要将其他未经Eppe

4、ndorf AG 承认的零部件、工具或物体放入电击杯座，有高电压！?仅使用所列零部件。经过 Eppendorf AG 承认，并获得安全证明其他零件也可使用。?未在该操作手册中提及的线路连接须事先得到制造商的允许。? 螺旋融合杯必须小心操作处理！ 松散或损坏的电极会对实验操作造成较大程度的影响。在这种情况下，螺旋融合杯不 能使用！在融合过程为结束前，不要打开螺旋融合杯。?微融合腔杯必须小心操作处理！ 小心加入细胞悬液！不要用枪头触及或移动电极以免造成损坏！在细胞排列融合过 程中，避免和电极的直接接触！?只有当微融合腔杯连接后才可进行细胞排列融合！ 连接电线仅为微融合腔杯的连接所设计！不允许有其他

5、连接！不要将插头接触液体！?当该仪器被非 Eppendorf 工程师维修或保养， 或未遵照操作规程和警示进行操作时， 该仪器 的拥有者或操作者对仪器的性能负责。 EppendorfAG 对上述行为所造成的损坏不负任何责 任。上述情况不会影响作为 Eppendorf AG 的销售和运输中保修和责任约定！? 在未得到 Eppendorf AG 书面允许情况下，操作手册的任何内容不能以任何形式进行复制。? Eppendorf AG 保留对该产品的技术更改权力！4仪器介绍该产品有四种不同层次的型号：最基本的是供真核细胞电转染所用。可以升级为用于细 菌和酵母的电转化，也可升级提供细胞融合的功能。这两个水

6、平加以联合应用形成第四个层次。Multiporator ?具有简易直观的键区和视屏界面，并且电击杯的插槽就位于键区的旁边。图1: Multiporator ?仪器，前面观。4.1 包装基本配置：可进行真核细胞电转染的 Multiporator ? 仪器（包括主要电线） ； 电击杯座； 电击杯（电极间距： 2 mm 4 mm）； 电转染低渗和等渗缓冲液； 操作手册和基本应用手册。选择 “细菌模式 ”配置： 整合有细菌模式的基本装置； 额外的电击杯（电极间距为 1 mm ）。选择 “细胞融合模式 ”配置： 整合有细胞融合模式的基本装置； 螺旋融合杯（电极间距为 0.2 mm ）； 螺旋融合杯插槽；

7、微融合杯（电极间距 0.2 mm）和专用插槽； 低渗和等渗细胞融合缓冲液。选择 “融合和细菌模式 ”配置： 整合有融合和细菌模式的基本装置。4.2开始Multiporator ?电源插座在，保险丝，电源开关在仪器后方。将电源插入仪器后方的插座, 再接好电源即可。揿一下电源开关即打开了仪器。图2： Multiporator ?仪器，后面观。电源连接口（左）打印机连接口（右）4.3电击杯座电击杯座位于仪器正面的键区旁边。将电击杯座拔出后即可取出电击杯。插入新的电击杯时，要保证杯子的塑料突起正好位于杯座后方的裂缝中，然后将杯座推到底。 仪器中的传感器可检测杯座是否有电击杯。注意：在搬运仪器时，确保电

8、击杯中没有电击杯，或者单独搬运电击杯座。有专用于 细胞融合”融合杯插槽。4.4键区键区用于设置参数、选择电转模式以及启动电转化。根据仪器的模式层次，一至四种模 式可供选择。键组合不仅可用于设置声音信号高低的设置，也可设置日期和时间。图3.带键区和屏幕的控制面板4.5键及键组合SETSET键用于选择预定的参数。屏幕中此参数有下划线标识。揿动SET键合适的次数，可设定更多的参数。 重复按动SET按钮直至屏幕上的下划线消失，或者按动MODE或START按钮均可结束 SET模式设置。（注意：MODE键可转入另一个模式。）上下箭头键可进行参 数的改动。当到达参数最低设置值后会跳到该参数的最高设置值。同样

9、，最高数值达到后也会跳到最低值。MODEMODE键用于选择激活电转化模式。 若仪器具有多种模式，该键能进行可能模式的选择, 即包括真核细胞模式在内最多有三种模式可供选择。相关符号出现在屏幕上：O:真核细胞的模式 模式水平：基本 使用脉冲：指数衰减波O：细菌和酵母的模式 模式水平：细菌模式 使用脉冲：指数衰减波、：细胞融合的模式 模式水平：融合模式 使用脉冲：方波脉冲START揿动SATRT按钮即启动程序操作。Arrow keys箭头键用于改变预设的参数（下划线标识）Sett ing the date同时揿动SET和MODE按钮即可进入日期和时间的设置状态。再次揿动SET按钮，屏幕上日期和时间的

10、下划线会从左移至右，然后用上下箭头键进行改动。重复揿动SET键直到屏幕上的下划线消失即结束日期和时间的设定。或者揿动MODE或START键下划线也可消失。（注意：MODE键可转入另一个模式。）nJSetti ng the volume of the acoustic sig nals同时揿动 MODE和START键即可进入声音信号音量的调节状态。在屏幕的最底部出 现” VOLUME以及百分比数值。百分比数值表示音量高低和音调类型，改变上下箭头键可 以改变音量和音调。揿动SET、MODE、或START按钮即可结束声音的设定。（注意：MODE键可转入另一个模式。）“VOLUME即从屏幕上消失。Re

11、set关闭电源总开关即结束了实验，Reset键与电源总开关功能一致。4.6屏幕显示实验相关参数以大粗体形式出现在屏幕上，约2至4行。参数和数值随选择的模式而改变,而日期和时间地出现在第一行。选择的模式以一个符号出现在最低行的右侧：O:真核细胞的模式模式水平：基本O：细菌和酵母的模式模式水平：细菌模式细胞融合的模式模式水平：融合模式“ VOLUME或实验剩余时间同样出现在这一行。1I2.AUG.0013:37U 500V Tn 1VOLUME 忆叫图：设置提示信号音量屏显实验中和实验结束后，屏幕转为显示该次实验设置的相关信息。4.7真核细胞和细菌/酵母的电转化实验采用一次性的电击杯，生物学样品放

12、在电极间的缝隙中。样品体积遵照电击杯上的标 示体积。虽然电极上的液体不会明显影响实验，但总体效率会下降。电击杯的磨砂窗可供作记号。电击杯的塑料突起可保证杯子按正确方向插入电击杯座中。杯盖可盖住杯子。但是，安全 起见，避免过大压力，盖子和杯子不能密封太严。加好样品的电击杯在转运途中要保证垂直方向，以免样品漏出。PldStlC CUVHltPlastic noseElf?r.t-odes图4:电击杯的结构图抓住突出把手取出电击杯。加样后电击杯中不能有气泡。杯子接触到槽的底部。当电击杯放入转化槽中时， 必须注意保证杯子的突起位于长斜缝中, 完全插好电击杯的转化槽才可插至仪器底部进行实验。转化槽可储存

13、于低温环境中。在搬运仪器途中，请注意没有电击杯的转化槽会从仪器中滑落。4.7.1连接外接电极（电转化/电融合）的插件非标准零部件（见订购信息）含有一个插件，连接外接电极。改变功能键（P/F ）的位置,插件可连接外接电极进行电转化（符号：O）和细胞融合（符号：9）o 4 mm安全插头连接外接电极。Pfjgrrjgn nI she fimdion switch for el&itropcirati -n PRosilon ofI训i口inh fer etectrdfuwoni F1连接插座，火线（红色）2连接插座，地线（黑色）当用外接电极进行细胞电融合实验时，由于插头连接，一个50欧姆的电阻与电极

14、并联。使用外在电极必须仔细检查是否符合国家安全规定以及电磁兼容性应用规定，确保安全！使用者必须对所有连接的设备负责！4.8细胞融合（可选择）4.8.1优化细胞融合（镜下监测）为了优化细胞融合参数，有必要借助特殊的微融合杯在显微镜下观察监测细胞排列和融 合。微融合杯通过专用的连接线（将近 1米长）与微融合插口相连。Insert of mlcrofjsion dhambar1 Contaci&2 Eadhirn 环卩rin护M crMusion chamber1 Co axial connector注意：轻拿轻放微融合杯！小心加好细胞悬液！不要用枪头触及或移动电极，防止损坏！细 胞排列/融合过程中

15、避免与电极直接接触！只有将微融合杯连接后， 细胞排列/融合才能进行！微融合杯紧紧连接 Multiporator ?。将微融合杯（加有大约 50 ul的细胞悬液）放在显微镜下。注意：在电极周围小心滴加细胞悬液增加电极间的细胞数。夹片可以在显微镜平台上固定微融合杯，也可用于固定玻片。将微融合杯和专用连接线连接起来。聚焦电极和细胞。揿动START按钮按预先设定的参数进行细胞排列/融合。可以在镜下加以监测。gi 厳 betgon the etelrodw in wllCdls 诃fiisun And hiSiion pgrkici舟微融合杯的最大注入体积大约为200 ul。已经确定的参数可直接用于螺旋融合杯。482清洗微融合杯用洗瓶中的