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1、1.1 实验仪器及耗材：BL420E+生物机能实验系统公司 生物信号导联电极（三向） 司CZF/BZF SZC/SZB 型非接触式电涡流传感器公司 信号采集针银针 ATZ-4,8 型弹簧度盘秤 公司 数字式脊髓损伤动物模型制备仪 中心一次性注射器（1ml, 5ml, 10ml） 公司一次性使用无菌注射器（ 2ml） 司金属骨针（克式针）司Argox Amigo 系列条形码打印机 司常规手术器械厂 缝合用针线 厂 温度计 理所 棉签 公司 大鼠营养饲料 中心急性脊髓损伤动物模型制备材料与方法1. 实验仪器及试剂成都泰盟科技有限成都泰盟科技有限公 杭州华瑞仪器有限永康市华鹰仪器有限 成都医学院基础
2、医学实验技术 上海双鸽实业有限 浙江欧健医用器材有限公 上海浦东金环医疗用品有限公 立象科技股份有限公 上海医疗器械（集团）有限公司手术器械 上海医用缝合线厂、江苏省淮阴医疗器械 江苏省无锡县标准计量管 成都市华辉医疗器械有限 华西医科大学动物供应1.2 试剂酒精 75%：自行配制生理盐水：四川科伦药业股份有限公司 产品批号：C070311 G1 碘伏： 四川华天科技实业有限公司 产品批号：20070202 阿司匹林肠溶片 ：南京白敬宇制药有限公司 产品批号：061006 注射用青霉素钠80万单位：哈药集团制药总厂 产品批号：A06086310 葡萄糖氯化钠 ：成都军区总医院 产品批号：070
3、20708 1.5%戊巴比妥钠：自行配制1.3 主要试剂的配制1.3.1 75%酒精 ：1.3.2 阿司匹林溶液：选取14片阿司匹林片剂，碾磨1.3.3青霉素溶液8U/ml：用针筒量取10ml生理盐水，溶解80万单位1.3.4 1.5%戊巴比妥钠溶液的配制：2. 实验方法2.1 实验大鼠的选取及麻醉标准 该动物模型制备实验对大鼠有严格的限定，选取 Spargue-Drawly 大鼠，年龄为771d,体重为260 土 go麻醉标准为雄性65mg/kg,雌性 40mg/kg。2.2 实验大鼠手术2.2.1 大鼠抓取、麻醉及固定：抓取手术大鼠，腹腔注射麻药。大约三分 钟左右，大鼠出现站立不稳，醉酒样
4、步态。四肢固定与手术台上，松紧适 中，手术过程中注意观察四肢是否出现瘀血，注意按摩。此时，可用大头 针刺激大鼠尾巴，如果大鼠的反应不强烈，预示着可以开始手术。2.2.2 大鼠打击区域的选定及手术：首先剪除大鼠胸椎区域毛，而后均匀 喷洒碘伏溶液两倍备皮区域。在大鼠背部脊柱有一个明显的凸起，经过大 量的解剖实验证明该凸起为T11,从该凸起区域剖开皮肤2 3cm，逐步暴 露筋膜、肌肉直到椎骨。由该凸起出发向前数两个节段即T9,用手术刀小 心刮去T9椎骨上的肌肉。随后进行椎板切除术，移植暴露到硬脊膜。2.2.3 打击装置的安装固定、调整及记录电极的挟持：该打击装置利用物 体自由落体运动，打击金属杆 从
5、6.25mm,12.5mm,25mm,50mm四个不同的高 度，以初速度为 0，自由下落打击暴露的脊髓，压迫脊髓。根据具体打击 高度安装非接触式位移传感器，位于打击杆的圆盘上，距离小于30mm，并 限定金属杆恰恰接触（未压缩）时为零高度。电位变化记录夹，红色夹子 挟持于T11棘突，黑色夹子挟持于T9同一水平面的肌肉和皮肤，在T13 与T12椎骨之间的缝隙处，插入银针約1cm,白色夹子挟持银针顶端。非接触式位移传感器信号输出线导入BZF-III型电涡流式前置变换器 并由此导入 BL-420E+ 第二号通道。电位变化记录夹采集信号导入 BL 420E+第一号通道。在BL-420实验系统软件选择实验
6、通道输入信号，一号 通道选择神经放电，二号通道选择2.2.4脊髓打击、金属杆和脊髓电位变化记录：从注射麻药601min后， 释放选定高度的金属杆对脊髓进行打击。电涡流传感器将会在空间上 20 微米，时间上20微秒采集金属杆在空间上物理位移所有点，并且输出一系 列的电压信号，经过信号转换器输入电脑，程序将会自动生成一条能反应 整个金属杆的速度位移曲线。电位记录将会从三个不同的地点采集脊髓 受到打击时所释放的不规则的电位变化。2.2.5 大鼠术后处理：打击完毕后，立即用消毒的手术缝合针线分别对肌 肉、筋膜和皮肤进行缝合，每缝合完一层时用酒精对其消毒，缝合完皮肤 后在缝合区域均匀的喷洒碘伏。由于大鼠
7、在手术过程中会有一定量的血液 丧失，术后会出现寒颤现象，因此需要对大鼠注射lml (8U/ml)青霉素、 5ml葡萄糖氯化钠溶液、lml阿司匹林溶液，且在大鼠尾部固定条形码。而 后将大鼠平放于干燥的鼠笼重叠于装有45-50C的温水中，保温7小时。 3大鼠日常护理：大鼠急性脊髓损伤后，T9以下的神经对各个脏器及肌肉 组织失去了制备，一般以瘫痪(后肢运动功能障碍)、尿潴留、大便异常和 自噬症为主。因此需要对大鼠进行细心护理，每天洗澡一次，注意对伤口 的处理。每天早晚两次对大鼠膀胱、后肢按摩，帮助排尿，记录尿量和PH 值；还需要用药，每天注射lml (8U/ml)青霉素，前七天，lml阿司匹林 溶液，每天早晚两次 5ml 葡萄糖氯化钠溶液。饲料和饮用水正常供应。
