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1、实验前玻璃仪器的预先处理一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。2、为下一次的课做好器材的准备工作。二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。为保持灭菌 后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。 这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验 结果，甚至会导致试验的失败。灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内， 通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空 气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而
2、增 加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100C的温度。导致菌体蛋白 质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用 具。一般培养基在121. 3C灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细 胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含 水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快， 反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160170C），时间长（12小时）。但干热灭菌温度不能超过180C，否则， 包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。三、试剂和
3、仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、 棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容 （一）玻璃器皿的清洗：新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入2%盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流 水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器 使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上 晾十，即可使用。常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷 洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。带菌玻璃器皿的洗涤凡实验室用过的菌种以
4、及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后 才能进行刷洗：1、带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.1MPa 灭菌2030 min后再刷洗。含菌培养皿的灭菌，底盖要分开放入不同的桶中， 再进行高压灭菌。2、带菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有35%来苏 尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，再经0.1MPa 灭菌20 min后，取出冲洗。3、带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有35%来 苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取 出经清水冲干净。如用于细菌
5、染色的载玻片，要放入50g/ L肥皂水中煮沸10min,然后用肥皂水 洗，再用清水洗干净。最后将载玻片浸入95%酒精中片刻，取出用软布擦干，或晾十， 保存备用。若用皂液不能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。4、含油脂带菌器材的清洗单独高压灭菌：用0.1MPa灭菌2030 min趁热倒去污物一倒放在铺有吸 水纸的篮子上一用100 C烘烤0.5h用5%的碳酸氢钠水煮两次一再用肥皂水刷 洗干净。（二）、玻璃器材的晾干或烘干不急用的玻璃器材：可放在实验室中自然晾干；急用的玻璃器材：把器材放在托盘中（大件的器材可直接放入烘箱中）， 再放入烘箱内，用80120C烘干，当温度下降到60C以下再
6、打开取出器材使用。（三）器皿的包扎：要灭菌后的器皿仍保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。（1）培养皿：洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢 固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后进行灭菌。（2）吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在 使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支 吸管用一条宽约45cm的纸条，以3050C的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在 头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成 一束进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，抽出试管。(3) 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的
7、棉塞，棉塞可起过滤作用， 避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和 缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度 不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求 来选择和采用合适的塑料试管塞。若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。 三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。(四) 、玻璃器材的灭菌灭菌:干热灭菌：160165C烘箱中灭菌2尿 或湿热灭菌：121 C 2030min干热灭菌法1、将包扎好的玻璃器皿摆入电热烘箱中，相互间要留有一定的空隙，以便空气 流通。
8、2、关紧箱门，打开排气孔，接上电源。3、待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，加热至灭菌温度后，固定温 度进行灭菌：160C165C保持2小时。2小时后切断电源。4、待烘箱内温度自然降温冷却到60C以下后，再开门取出玻璃器皿，避免由于 温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。高压蒸汽灭菌法1、关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容 易造成事故。2、将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将 每个螺旋旋转到一定程度（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平 衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。3、通电加温，打开排气活门，排尽锅内的空
9、气。通常当压力表指针升至5磅 或0.05MPa时，打开排气活门放气，待压力表指针降至零点一小段时间后，再关 闭活门。即活门冲出的全部是蒸汽时则表示彻底，此时可关闭排气活门，如果过 早关闭活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。4、恒温灭菌：0.1MPa或15磅压力保持2030分钟。压力表的指针上升时，锅 内温度也逐渐升高，当压力表指针升至0.1MPa时或15磅时，锅内温度相当于 120C121C（等于一个大气压），此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于 0.1MPa或15磅压力保持2030分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加 温。当达到所需温度时开始计时，并在此温度下保持所需的时间。5、
10、降温：自然降温或打开活门排汽降温。稍微打开一点排气活门，使锅内蒸汽 缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅 内的培养基沸腾而冲脱或沾染棉花塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处 理时间过长，对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。6、当锅内蒸汽完全排尽时即压力表指针降到零时，要立即打开锅盖。7、取出灭菌物品：当锅内温度下降到60C左右时器材或培养基。如培养基需制 备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘， 冷却后便可收起。8、最后将高压灭菌器内的剩余水排出。9、观察灭菌效果。把灭菌培养基放入25C温箱中，培养48小时观察灭菌效果。48小时后不见杂菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。
