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1、叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验目的：1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原 理和方法 2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光实验原理：差速离心法用于分离大小不同的物体。在差速离心中细胞器沉降的顺 序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、 醉后为核糖核蛋白复合体。密度梯度离心法是用一定的介质在离心管内形成连续的密度梯度，将 细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力的作用使细胞或细胞 器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与自身密度相同的 沉降区带中。叶绿体是一种比较大的细胞器，利用差速离心即可分离收集，然后用 密度梯度离
2、心纯化，便可用于各种研究。实验用品：新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离心机、电子天平、荧光显微镜、剪刀、研钵、移液管、漏斗、滴管、10ml离心管实验步骤：1、选取新鲜嫩绿菠菜叶，去叶梗及粗脉，洗净擦干，称 30 克放于 150ml 0.35M.Nacl 溶液中2、将液、叶同装入组织捣碎机中，匀浆 3-5 分钟，转速 5000r/min3、将匀浆用纱布（6 层）过滤于 500ml 烧杯中4、取滤液 4ml 在 1000r/min 下离心 2min5、取上层清液在3000r/min下离心5min （沉淀为叶绿体和细胞核混 合物）6、将沉淀用 2-3mlMnacl 液悬浮7、取一滴悬液滴片，加盖玻片后显微镜下观察8、另取一滴悬液滴片，再滴加一滴 0.01%吖啶橙染料，混匀，盖上 盖玻片，在荧光显微镜下观察实验结果：普通显微镜下，叶绿体呈橄榄形，绿色，高倍镜下可看到基粒（深绿 色小颗粒）。荧光显微镜下，叶绿体自发荧光为“火红色”，次生荧光 为“橘红色”分析与讨论：1、捣碎叶片式时时间不宜过长，否则会破坏叶绿体 2、用荧光显微镜找到物象后，要先拍照后观察，因为荧光会逐渐 变弱
