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1、细胞总蛋白提取方法一、溶液配制1. 100mM NaF (NaF MW=41.99) 10ml称取NaF 41.99mg，超纯水8ml溶解后定容至10ml。2. 100 mM PMSF3. RIPA溶液 100ml成分分子量终浓度Tris121.140.6 g5.0 mM (pH 7.4)NaCl58.440.87 g150 mM EDTA372.2437.22 mg1 mMNP-401 ml1%SDS0.1 g0.1%脱氧胆酸钠0.5 g0.5%溶解于80 ml超纯水中，待溶解后加入HCl调pH值至7.4，定容至100 ml。使用前加入 成分储存浓度加入量终浓度PMSF100 mM10l/1
2、ml1 mM NaF100 mM10l/1ml1 mMAprotinin10g/l0.2l/1ml2g/lLeupetin10g/l0.2l/1ml2g/l二、方法1. 细胞收取1) 细胞传代至60mm培养皿中，待细胞融合约100%，收集细胞2) 弃培养基，加入PBS 2ml清洗培养皿一次，弃PBS。分两次将细胞收至一个管中3) 加入0.05%胰酶2ml，37温育1min。4) 待细胞变形后，将细胞吹下转移至一个1.5ml ependorf 管中，10,000rpm3min，45) 弃上清，1ml预冷的PBS清洗沉淀，10,000rpm3min，46) 重复PBS清洗一次7) 弃上清，-80冻存待裂解2. 蛋白提取加入缓冲液前先将细胞沉淀敲散，加入后吹打细胞沉淀使其松散1) 向细胞沉淀中加入200l RIPA缓冲液(含1mM PMS、1mM NaF、2g/ml Aprotinin、2g/ml Leupetin)，混匀后冰上放置40mins2) 10,000rpm15min，4将上清转移至一个新的ependorf 管中（约250l）
