《毕业设计论文纤维素酶辅助法提取核桃叶中总黄酮》由会员分享，可在线阅读，更多相关《毕业设计论文纤维素酶辅助法提取核桃叶中总黄酮（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、楚雄师范学院本科论文（设计）楚 雄 师 范 学 院本 科 生 毕 业 论 文 题 目：纤维素酶辅助法提取核桃叶中总黄酮 专 业： 科学教育 姓 名： 学 号： 指导教师： 职 称： 副教授 论文字数： 6211字 完成日期： 2015 年 7 月教 务 处 印 制目录摘要I关键词IAbstractII Key wordsII前言11 实验部分21.1原料、仪器和试剂21.1.1原料21.1.2试剂21.1.3仪器21.2实验方法21.2.1原料处理21.2.2黄酮的提取21.2.3黄酮的定性检验21.2.4核桃叶中总黄酮得率的测定21.2.4.1芦丁标准溶液的配制31.2.4.2测定方法依据3
2、1.2.4.3测定波长的选择31.2.4.4标准曲线的绘制31.2.4.5样品液中总黄酮含量的浓度31.2.4.6核桃叶中总黄酮得率的计算31.2.5单因素实验31.2.5.1酶浓度对核桃叶总黄酮得率的影响31.2.5.2酶解时间对核桃叶总黄酮得率的影响41.2.5.3酶解温度对核桃叶总黄酮得率的影响41.2.5.4酶解液pH对核桃叶总黄酮得率的影响41.2.6正交实验42 结果与分析42.1黄酮的定性检验结果52.2黄酮含量的测定结果52.2.1测定波长的确定52.2.2标准曲线的绘制52.3单因素实验结果62.3.1酶浓度对核桃叶总黄酮得率的影响62.3.2酶解时间对核桃叶总黄酮得率的影响
3、72.3.3酶解温度对核桃叶总黄酮得率的影响72.3.4酶解液pH对核桃叶总黄酮得率的影响82.4正交实验93 结论10参考文献11致谢12纤维素酶辅助法提取核桃叶中总黄酮摘要：采用酶解法与乙醇浸提法相结合从核桃叶中提取总黄酮，从酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解液酸度考查提取条件对核桃叶中总黄酮得率的影响，进行正交实验，用显色反应进行定性鉴定，以芦丁为标准对照品，测定核桃叶样品液中总黄酮的得率。结果表明，当乙醇浓度为70%，料液比为1:15g/mL，浸提温度50，浸提时间1.5h时10，酶解最佳条件为：酶浓度0.20mg/mL、酶解时间1.5h、酶解温度60、酶解液pH=6.0，在此条件下核桃
4、叶中总黄酮得率可达10.05%。关键词：纤维素酶；乙醇浸提；核桃叶；总黄酮 CeLLuLose enzyme assisted extraction technoLogy of totaL fLavonoids in the Leaves and stems of waLnut research Abstract: Using enzymatic hydrolysis combined with ethanol extraction to extract flavonoids from walnut leaf, from the enzyme concentration, enzymolysi
5、s time, enzyme solution temperature, solution pH examination extracting conditions of flavonoids in walnut leaf yield, the effect of orthogonal experiments, using the qualitative identification of chromogenic reaction, rutin as the standard reference substance, determination of flavonoids in walnut
6、leaf yield. Results show that the extracted by 70% ethanol solution as solvent, and solid-liquid ratio 1:15 g/mL, leaching temperature 50, leaching time 1.5 h as a condition of reference, in this condition when the enzyme concentration is 0.20 mg/mL, enzymolysis time of 1.5 h, enzyme solution temper
7、ature of 60, enzyme solution pH = 6.0, walnut leaf flavonoids yield could reach 10.05%. Key words: Cellulase；Ethanol extraction；Walnut leaf；General flavone12纤维素酶辅助法提取核桃叶中总黄酮前言 在云南大理州巍山县紫金乡一带核桃资源丰富，人们除利用果实、木材外，对核桃叶及外果皮很少利用。核桃叶含VB、VC、VD、VE、胡萝卜素等丰富的营养物质与核桃醌、核桃甙、鞣质及黄酮类等生物活性物质，其中黄酮类化合物含量可达7.26。核桃叶能防治维生素缺
8、乏症、淋巴结、甲状腺肿大、黄疸病、结核病等，也能解毒、消肿等1。 黄酮类化合物是广泛地存在于植物中的一类化合物，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血压、调节内分泌等多种功能，还具有强有力的自由基清除性和较强的天然抗氧化性，在医药、化妆品、食品等领域有着广泛的应用。从植物中提取黄酮类化合物的方法有溶剂法1（热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法）、微波辅助提取法3、超声波振荡提取法6、酶辅助提取法4、双水相提取法1、半仿生提取法、膜分离法、热压流体萃取法、高压液相提取法1。目前人们对核桃叶中黄酮的提取研究用的方法是以槲皮苷为对照品，采用氯化铝显色紫外分光光度法，结合单因素试验和正交试
9、验对该体系进行系统优化研究，或者以70%乙醇回流法，测定山核桃叶中总黄酮的含量10。 纤维素酶能破坏核桃叶细胞壁纤维素的苷键，降解纤维素，使细胞壁疏松、破裂，减少提取过程中的传质阻力，据所查文献尚未有用纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究的相关报道，因此，本课题尝试用纤维素酶酶解预处理与乙醇浸提法相结合从核桃叶中提取总黄酮，通过单因素试验考察酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解液pH对总黄酮得率的影响，优化提取工艺条件，以期为核桃叶中黄酮类化合物的高效利用提供参考。1 实验部分1.1原料、仪器和试剂1.1.1原料核桃叶（采自云南大理巍山县紫金乡）。 1.1.2试剂纤维素酶，芦丁标准品(中国药品
10、生物制品检定所)，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，无水醋酸钠，冰醋酸，无水乙醇等均为分析纯，精密pH试纸。1.1.3仪器722型光栅分光光度计（山东高密分析仪器厂），HH-S2S恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂），CP214C电子天平（奥豪斯仪器有限公司制造），摇摆式植物粉碎机。1.2实验方法1.2.1原料处理摘取新鲜的核桃叶洗净阴干粉碎备用。1.2.2黄酮的提取准确称取核桃叶粉0.5000g，置于150mL的锥形瓶中，加入一定用量的纤维素酶，再加入10.0mL一定 pH值的HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀并盖上锥形瓶塞置于一定温度下酶解，升温至85将酶灭活，在70%乙醇中，料液比为1:15g/m
11、L，50下恒温浸提1.5h，过滤、洗涤，合并滤液，定容于50mL容量瓶中，得样品液。1.2.3黄酮的定性检验10铝盐反应：取样品液1.00mL于试管中，加入几滴10%硝酸铝溶液，振荡。溶液颜色显黄色，则说明样品液中含有黄酮。氢氧化钠反应：取样品液1.00mL于试管中，加入几滴4%氢氧化钠溶液，振荡。溶液颜色显亮黄色，则说明样品液中含有黄酮。铁离子反应：取样品液1.00mL于试管中，加入几滴5%三氯化铁溶液，振荡。如果溶液颜色显墨绿色，则说明样品液中含有黄酮。1.2.4核桃叶中总黄酮得率的测定1.2.4.1芦丁标准溶液的配制准确称取预处理过的芦丁标准品10 mg，用70%乙醇溶解后定容至50mL
12、，得浓度为0.20mg/mL的芦丁标准溶液。1.2.4.2测定方法依据以芦丁标准液为对照品测定核桃叶提取液中总黄酮的得率，加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液、氢氧化钠溶液，在碱性条件下使黄酮与铝盐形成有色络合物，在可见光区获得稳定的特征吸收峰。1.2.4.3测定波长的选择9精确吸取芦丁标准溶液1.00mL，置于25mL的比色管中，加入5%的亚硝酸钠溶液0.30mL，摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.30mL , 摇匀，放置6min；再加入4%的氢氧化钠溶液4.00mL, 摇匀，用70%的乙醇溶液定容，摇匀，放置10min；以不加芦丁标准液作为空白参比，在波长460550nm的范围测定吸光度
13、,选择最大吸收波长。1.2.4.4标准曲线的绘制9准确吸取0.20mg/mL芦丁标准液0.00 ，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00mL分别置于7支25mL比色管中，各加5%的NaNO2 溶液0.30mL，摇匀，放置6min，加10%的Al (NO3)3溶液0.30mL，摇匀，放置6min，加4%的NaOH溶液4.00mL，摇匀，用70%乙醇定容至10mL刻度线，摇匀，放置10min后，以空白试剂为参比，在最大吸收波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁标准液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程。1.2.4.5样品液中总黄酮含量的浓度量取样品液0.50mL，定容于50
14、mL容量瓶中，按1.2.4.4操作方法显色后，在最大吸收波长处测定吸光度，根据回归方程，测定出样品液中总黄酮的浓度。1.2.4.6核桃叶中总黄酮得率的计算4根据核桃叶样品液中黄酮浓度计算核桃叶样品液中总黄酮得率（%）= % 式中：C为核桃叶样品液中黄酮的浓度；V1为第二次定容后样品液的体积10mL ；V2为从母液中量取的样品液体积0.50mL ； M为核桃叶粉的质量0.5000g。 1.2.5单因素实验41.2.5.1酶浓度对核桃叶总黄酮得率的影响分别准确称取5份0.5000g核桃叶粉末置于5只锥形瓶中，分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mg纤维素酶，加入10.0mL、pH=5.0的HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀，在50的水浴温度下酶解1.5h；升温至85将酶灭活，然后在70%
