挥发性脂肪酸测定

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1、挥发性脂肪酸总量的比色测定法一、实验原理含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯 与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红 色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物挥发性脂肪酸的 含量成正比，故可用比色法测定。二、实验仪器容量瓶、吸量管、比色管、分光光度计三、实验试剂 1： 1硫酸：浓硫酸(相对密度1.84, C.P.)加到同体积蒸馏水中稀释配 制。酸性乙二醇试剂：取30.0mL乙二醇(C.P.)与4.0mL配制的稀硫酸混合。 4.5mol/L的氢氧化钠：称取18g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至 100ml。

2、 10%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟氨10.0g，溶于100mL蒸馏水中。羟胺试剂：量取40.0 mL4.5mol/L的氢氧化钠，与10.0mL10%的硫酸羟 胺相混合。酸性氯化铁试剂：将20.0g分析纯FeCl3 6H2O溶于500mL水中，准确3 2加入20.0 mL浓硫酸，并以蒸馏水稀释至1L。 乙酸标准液的配制。精确称取乙酸(分析纯，相对密度1.045，含量99.5%)1.0050g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。四、颜色实验取 10ml 乙酸标准液于 50ml 比色管中，并定容。吸取 0.5mL 样液置于比色管中，准确加入 1 mL 酸性乙二醇试剂，充分混合， 于

3、沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。然后立即将试管置于冷水中冷却。加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。 然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分摇匀, 静置5min。观察其现象。比色管中有棕红色络合物产生，故试剂正常，颜色的深浅在一个较大的范围内与 反应初始物的含量成正比，故可用比色法测定挥发性脂肪酸。五、实验步骤(1)乙酸标准曲线绘制：准确吸取 10 mg/mL 乙酸标准溶液 0.5mL、1mL、3mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、 12.0mL、15mL，分别置于50.0mL比色管内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即 得 0.1、0

4、.2、0.6、1.0、1.6、2.0、2.4、3.0mg/mL 的乙酸标准系列液。吸取0.5mL样液置于比色管中，准确加入1 mL酸性乙二醇试剂，充分混合, 于沸水浴中加热3min，应避免试管与加热器壁直接接触。然后立即将试管置于冷水中冷却。加入2mL羟胺试剂，并混匀，放置1min。然后各个管中加入10mL酸性氯化铁试剂，用蒸馏水定容到25mL，并充分 摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度。同样操作做空白试验 1 份。乙酸标准曲线浓度（mg/ml）（2）样品处理：使用大气采样器吸取经过大约一星期发酵后的橡胶所产生的气体，用10ml蒸馏水收集，置于容量瓶中。同上述操作进行实

5、验，并观察其变化。从左到右依次为：样品溶液、3mg/ml乙酸溶液、2.4mg/ml乙酸溶液、2mg/ml乙酸溶液、1.6mg/ml 乙酸溶液、 1.0mg/ml 乙酸溶液、 0.6mg/ml 乙酸溶液、 0.2mg/ml 乙酸溶液、 0.1mg/ml 乙酸溶液、空白比色管颜色对比：前排为样品%=0.0080K=0.0567A=KO+K1*CR2=0.9999A=0.0080+0.0567*C浓度(mg/ml)吸光度00.0080.10.0140.20.020.60.04210.0641.60.09820.1212.40.14430.179样品0.01样品浓度：C=0.035mg/ml所得的样品中的挥发性脂肪酸浓度低，疑似样品中含有氨氮。