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1、甘肃省部分地区土壤微生物资源调查及蔬菜、中药材无公害栽培用生防菌的筛选束弋兰州大学生命科学学院2000级摘要 甘肃省微生物资源丰富,本实验即是通过对从甘肃省部分地区采集的土壤样品进行大规模的菌株分离，共得到172株菌株。针对一些在蔬菜及中药材栽培过程中由真菌引起的病害，进一步从部分分离结果中筛选出16株对真菌生长有抑制作用的拮抗菌，同时选取了一部分拮抗菌进行了抑菌率的测定。但根据生防菌筛选的原则，真正具有实际应用价值的菌株只有D-14，F-3，F-15，F-23，F-24，F-26，G-1七株，其作用机理和田间推广需要进一步实验的验证。关键词：微生物资源 生防菌 蔬菜 中药材Investiga
2、te Microoganism Resourses and Screen of Biocontrol Bacteria that are Beneficial for Uncontaminated Planting of Vegetables and Chinese Traditional Medicine in soil samples from parts of Gansu ProvinceShu YiSchool of Life Sciences, Lanzhou University Abstract Some diseases, caused by pathogenic fungi
3、during the planting of vegetables and Chinese traditional medicine, can be controlled by antagonistic bacteria. In this experiment, 172 strains of bacteria were separated from large amounts of soil samples, which were taken from parts of Gansu province. Among these strains, 16 inhibited the growth o
4、f the pathogenic fungi. And at the same time, we measured the bacteria inhibition rate. However, according to the principle of screening biocontrol bacteria, only 7 strains (D-14，F-3，F-15，F-23，F-24，F-26，G-1) of them had practical value, and the functional mechanism needs deep research to spread thei
5、r application into fields. Key words: microoganism resources biocontrol bacteria Chinese traditional medicine vegetables前言 自20世纪中叶以来，随着化学工业的高速发展，人们通过化学合成的方法大量研制、生产农药，并在农业上广泛使用，对农业的发展做出了巨大的贡献，使得农作物病虫害得到了有效的控制，农作物的产量也随之大幅度增长。然而半个多世纪过去了，由于无节制地使用化学农药，严重的制约了现代农业的可持续发展，并危害到人类的健康和生存，同时，也造成自然生境的破坏。因此，人们正在努力
6、寻求一种能有效控制有害生物的同时又具有无公害优点的生物防治办法，即利用微生物及其基因产生或表达的各种生物活性成分，制备出防治植物病虫草害以及调节植物生长的微生物农药。微生物农药具有以下优点：(1)对病虫害防治效果好，对人畜安全无毒，不污染环境，无残留；(2)对病虫的杀伤特异性强，不伤害天敌和有益生物能保持生态自然平衡；(3)生产原料和有效成分属天然产物，它可回归自然，保证可持续发展；(4)可用生物技术和基因工程的方法对微生物进行改造，不断提高其性能和质量；(5)多种因素和成分发挥作用，害虫和病原菌难以产生抗药性1，2。所以，对于微生物农药的开发研究受到国内外各研究机构的广泛关注3，4，5。而微
7、生物农药生产的第一步即是要针对具体的病害，通过一定的方法分离筛选出具有显著防治效果的拮抗菌。然后应用拮抗菌本身或其代谢产物，进行产业化生产，以生物农药的新形式应用于农业生产6，7，8，经济作物栽培9等多个方面。 本实验是针对土壤中的微生物进行的筛选生防菌的工作，采样地选择在甘肃省部分地区的农田和自然环境地，因为甘肃省地处中国的西部，生态环境具有明显的地方特点，是一个尚未开发的微生物资源宝库。因此，我们从该地区采样并进行资源调查，通过实验，希望能分离筛选到对蔬菜和中药材栽培过程中，由真菌引起的病害有良好防治效果的生防菌，以备此后的产业化生产和田间推广应用。材料与方法1材料1.1土壤样品：A组土样
8、：玉米地中（1） 榆中县大营村 2003.7.24玉米地中（2） 榆中县大营村 2003.7.24大麦地中 榆中县大营村 2003.7.24胡麻地中（1） 榆中县大营村 2003.7.24胡麻地中（2） 榆中县大营村 2003.7.24小麦田中（未收）（1） 榆中县大营村 2003.7.24小麦田中（未收）（2） 榆中县大营村 2003.7.24土豆地中（1） 榆中县大营村 2003.7.24土豆地中（2） 榆中县大营村 2003.7.24小麦田（已收） 榆中县大营村 2003.7.24B组土样：荒地中 榆中县大营村 2003.7.24土豆地中（1） 榆中县 2003.7.24土豆地中（2）
9、榆中县 2003.7.24 兴隆山河边泥地 榆中县 2003.7.24 荒地中 榆中县 2003.7.24 大麦地中 榆中县大营村 2003.7.24 胡麻地中 榆中县大营村 2003.7.24 兴隆山河边 榆中县 2003.7.24 土豆地中（尾部作种子） 榆中县大营村 2003.7.24 萝卜地中 榆中县大营村 2003.7.24C组土样：桐家沟 陇南 2003.7.24 兴隆山东山山脚 榆中县 2003.7.24 兴隆山山脚草地（1） 榆中县 2003.7.24 兴隆山山脚草地（2） 榆中县 2003.7.24 兴隆山西山山脚（1） 榆中县 2003.7.24 兴隆山西山山脚（2） 榆中
10、县 2003.7.24 兴隆山西山下河谷地 榆中县 2003.7.24 兴隆山河中泥 榆中县 2003.7.24 兴隆山西山脚树荫下 榆中县 2003.7.24 兴隆山山脚 榆中县 2003.7.24D组土样：侧柏田中 定西 李家堡 2003.7.24 甘草田地边 定西 李家堡 2003.7.24 土豆地中（1） 定西 李家堡 2003.7.24 土豆地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24 玉麦地边（1） 定西 李家堡 2003.7.24 玉麦地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24 麦田中 定西 李家堡 2003.7.24 胡麻地中 定西 李家堡 2003.7.24 板蓝根地边 定
11、西 李家堡 2003.7.24 草药田边 定西 李家堡 2003.7.24E组土样：徐家山公园自然环境地 兰州市 2003.7.22 豇豆地中央 兰州市 徐家山 2003.7.22 生菜地 雁滩乡 马教泥湾 2003.7.22 排洪沟底 兰州市 徐家山 2003.7.22 麦田中 定西 李家堡 2003.7.24侧柏地边 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中的黄芪植株下 定西 李家堡 2003.7.24云杉林地中 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中（1） 定西 李家堡 2003.7.24甘草地中（2） 定西 李家堡 2003.7.24F组土样：苦瓜地边（有病情） 安宁 吴家湾 200
12、3.7.22茴香地 雁滩乡 黄教泥湾 2003.7.22玉米地边（有病情） 安宁 吴家湾 2003.7.22辣椒地边（正常） 安宁 吴家湾 2003.7.22辣椒地边（立枯病发病区） 安宁 吴家湾 2003.7.22高粱地边 安宁 吴家湾 2003.7.22辣椒地边（有病情） 安宁 2003.7.22葱地 雁滩乡 马教泥湾 2003.7.22甘蓝菜地中央 兰州市 徐家山 2003.7.22茄子地边（有病情） 安宁 2003.7.22G组土样：韭菜地（由于病情严重，韭菜已拔除） 马滩 2003.7.22茄子地（有茄早疫发生） 马滩 2003.7.22茄子地（有病情） 马滩 2003.7.22桃林
13、边的水沟底 安宁 2003.7.22菊科花田 安宁 红意村 2003.7.22葡萄地边 安宁 2003.7.22葡萄田植株下（有病毒感染） 安宁 2003.7.22豇豆地边（有病情） 安宁 2003.7.22韭菜地 马滩 2003.7.22韭菜地（有病情） 马滩 2003.7.22H组土样：七米沟（1） 陇南 2003.7.24 七米沟（2） 陇南 2003.7.24许家店前公路旁小坡 陇南 2003.7.23牛墨山南坡半山处（1） 陇南 2003.7.24牛墨山南坡半山处（2） 陇南 2003.7.24甘沟金矿北山 陇南 2003.7.23二郎乡店子北坡 陇南 2003.7.24偏沟 陇南
14、2003.7.24桐家沟 陇南 2003.7.24成县北10公里处 陈院 陇南 2003.7.241.2病原真菌实验选用的16种病原真菌为实验室保存的菌种，其中2，3，4，5，6，7，9和12真菌是从发病猕猴桃中分离得到的，尚未鉴定；另外8种真菌为：13：脱顶镰刀菌（Fusarium acuminatum），14：尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum），15：半裸镰刀菌（Fusarium semiteetum），16：辣椒黑腐病菌（Alternaria solani），17：尖孢镰刀菌（黄瓜枯萎病菌）（Fusarium oxysporum），18：番茄早疫病菌（Alternaria solani），19：茄子早疫病菌（Alternaria solani），20：立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）1.3培养基细菌培养使用NA培养基：牛肉浸膏0.3%(w/v)，酵母浸膏0.1%，蛋白胨0.5%，葡萄糖1%，琼脂1.5% PH=
