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1、-*乐至贵均卫生材料*医疗器械产品无菌检测方法1. 目的建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进展无菌检测，以确定灭菌的有效性。2. 范围本规程适用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。3. 依据中国药典2021 版4. 设备、器皿、药品的准备4.1设备的准备电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、干净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯4.2器皿的准备锥心瓶500ml、烧杯1000ml、试剂瓶60ml、量筒50ml、1000ml、培养皿90mm15mm、斜口钳、玻璃棒。4.3药品的准备硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、纯化水、pH7.0 无菌氯化
2、钠溶液。5. 器皿的清洗将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180条件下进展干热灭菌2小时。6. 取样按灭菌批次或者生产批次进展取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品7. 培养基的制备7.1硫乙醇酸盐流体培养基的制备取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45待用。7.2 胰酪大豆胨液体培养基的制备取15g胰酪大豆胨和1000ml纯
3、化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。8. 培养基灵敏度检查8.1 菌种的要求培养基灵敏度检查所用的菌株金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌传代次数不得超过5代。8.2菌液的制备接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35培养24小时；接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，20-25培养24小时。将上述经24小时培养后的培养物用0.9无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。制备好的菌液应在2-8条件下保存，并在24小时内使用。8.3接种及培养取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，
4、另一支不接种作为空白对照，30-35培养3天逐日观察并记录。取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25培养5天，逐日观察记录。8.4 灵敏度检测结果判断空白对照管应无菌生长，假设加菌的培养基试管菌落均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。9.供试品的无菌检测9.1 对照试验取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35培养14天逐日观察并记录。取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌
5、，另1支不接种作为空白对照，20-25培养14天，逐日观察记录。9.2供试品的准备及接种于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段23cm,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中，另外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量胰酪大豆胨液体培养基中，冷却。9.2培养将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中3035条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录；将接种过的胰酪大豆胨液体培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中2025条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录。10. 供试品无菌检测结果判定假设上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长，则可判定
6、供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。11. 无菌检测报告见附表1. z.-无菌检测报告检测依据中国药典2021 版 检测日期样品数量样品批号样品名称样品规格培养基的灵敏度检测硫乙醇酸盐流体培养基培养3天胰酪大豆胨培养基培养5天培养天数接种金黄色葡萄球菌接种金黄色葡萄球菌空白接种枯草芽孢杆菌接种枯草芽孢杆菌空白12345结论： 日期： 供试品的无菌检测培养天数硫乙醇酸盐流体培养基培养14天改进马丁培养基培养14天金黄色葡萄球菌样品1样品2空白白色念珠菌样品3样品4空白1234567891011121314结论： 报告日期： 备注+表示有菌生长；-表示无菌生长；培养基的灵敏度检测中空白试验应无菌生长，接种过菌液的应生长良好，否则培养基不合格；在培养基灵敏度检测合格的前提下，假设供试品的无菌检测中接种过菌液的应生长良好，空白试验和样品的检测应无菌生长；否则供试品的无菌检测不合格。检测者复核者. z.-. z.
