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1、粪大肠杆菌群测定方法水质类大肠菌群的测定粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。在。C温度下能生长 并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造 成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪 便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。粪大肠菌群的 测定可以用多管发酵法和滤膜法。第一篇多管发酵法1. 适用范围本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。2. 原理多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来表示试验 结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量 的
2、一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估 计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异 便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性 的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数 据的准确度而定。3. 培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实 验用水为新制备的去离子水。单倍乳糖蛋白胨培养液：成分：蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g%漠甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水 中，调节pH为，
3、再加入漠甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有 倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115C灭菌20min，贮存 于暗处备用。三倍乳糖蛋白胨培养液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三 倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。EC培养液：成分：胰月东20g乳糖5g胆盐三号磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4）氯化钠 5g蒸馏水 1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压 蒸汽灭菌器中，115C灭菌20min。灭菌后pH应为。培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30C的暗 处，存放时应避免阳光直接照射
4、，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液 颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。4, 步骤水样接种量将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。 每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、。受污染水样接种量根据污染 程度接种1mL、或、等。使用的水样量可参考下表1。表1接种用水量参考表接种量（mL）水样种类检测方法100 50 10 110-2 10-3 10-4 10-5井水 多管发酵法XXX河水、塘水多管发酵法XXX湖水、塘水多管发酵法XXX城市原污水多管发酵法XXX如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培
5、养液5mL； 如接种量为1mL或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL 中。初发酵试验将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37C 土 C下培 养24h2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可 轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。复发酵试验轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养 物转接到EC培养液中。在C 土 C温度下培养24h2h （水浴箱的水面应高于试 管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。培养后立 即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。5. 结果的计算根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表2或表3中查得每 升水样中的粪大肠菌群。接种水样为100mL2份、10mL10份、总量300mL时， 查表2可得每升水样中的粪大肠菌群；接种5份10mL水样、5份1mL水样、5 份水样时，查表3求得MPN指数，MPN值再乘10,即为1L水样中的粪大肠菌 群。
