实验一 药物的杂质检查

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1、实验一 药物的杂质检查实验目的:1. 掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法。2. 掌握杂质限度试验的概念及计算方法。3. 熟悉一般杂质检查项目与意义。实验原理：酸碱度、氯化物、硫酸盐、不挥发物、重金属的检查原理参见教材第三章中杂质检查 部分。实验器材：纳氏比色管，试药：葡萄糖、氯化钠原料药。仪器：50mL纳氏比色管、刻度吸管、lOOmL测砷瓶，药物天平。实验内容与方法：（一）葡萄糖1、酸度取本品2.0g,加水20mL溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.20mL，应显粉红色。2、溶液的澄清度与颜色取本品5g,加热水溶解后，放冷，用水稀释至10mL，溶液应澄清无色；如

2、显浑浊，与 1号浊度标准液（附录H）比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钻液3mL、 比色用重铬酸钾液3mL与比色用硫酸铜液6mL,加水稀释成50mL） 1.0mL加水稀释至1OmL 比较，不得更深。3、乙醇溶液的澄清度取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。4、氯化物取本品0.6g，加水溶解使成25mL，再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL 纳氏比色管中，加水使成约40mL,摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液6.0mL，置 50mL纳氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与 对照溶液中

3、，分别加入硝酸银试液1.0mL，用水稀释，使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟， 同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较（附录A）。供试溶液所显浑浊度不得较对 照液更浓（0.01%）。5、硫酸盐取本品2.0g，加水溶解使成约40mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中， 加稀盐酸2mL,摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液2.0mL，置50mL纳氏比色管中， 加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加 入25%氯化钡溶液5mL,用水稀释至50mL，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从 比色管上方向下观察、比较（附录B）。供试溶液

4、所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。6、亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。7、干燥失重取本品，在105C干燥至恒重，减失重量不得过9.5% （附录E）。8、炽灼残渣不得过0.1% （附录F）。9、铁盐取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成 45mL，加硫氰酸铵溶液（30-100） 3mL，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0mL用同一方法制 成的对照液比较，不得更深（0.001%）。10、重金属取25mL纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2mL 后, 加水稀释成25

5、mLo取本品4.0g,置乙管中，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2mL， 加水使成25mL；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色 溶液，使之与乙管颜色一致。再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2 分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（附录C）， 含重金属不得过百万分之五。11、砷盐取本品2.0g，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL，置水浴上加热约 20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的 水分，放冷，加盐酸5mL与水适量使成28mL，置测砷瓶

6、中，作为供试溶液。另精密量取标 准砷溶液2mL，照供试品制备项下方法，自加水5mL溶解后起，至置测砷瓶中，同法处 理，作为标准液。取供试溶液和标准液分别进行以下操作：加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴， 在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管密塞于测砷瓶上，并将测砷瓶置 2540C水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，比较。供试溶液生成的砷斑与标准砷斑比 较（附录D）,不得更深（0.0001%）。实验注意事项：1、比色管的正确使用一一选择配对的两支纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物，再用 水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。2、正确选用量具一一根据检查试验一般允许误

7、差为土 10%的要求和药品、试剂的取用量， 选择合适的容量仪器。3、平行操作一一标准与样品必须同时进行实验，加入试剂量等均应一致。观察时，两 管受光照的程度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时置黑色背景上, 自上而下地观察。4、注意刻度吸管的正确使用和观察。5、限量计算:杂质限量%=（V标准XC标准）/W样）X100%。式中V标准为标准液体积，C标准为标准液浓度，w样为样品取样量。实验报告：实验结束后，书写实验报告。实验一 指导要点：1. 比色管的选择、洗涤和使用选择两支配对的纳氏比色管，50mL比色管有25mL和50mL两个刻度，要求两管的粗 细、长短、玻璃颜色、刻度高低等一

8、致。比色管的清洁不能用毛刷刷，以免玻璃发毛，影响 比色、比浊，应用清洁液荡洗，然后用水冲洗干净。比色管使用中不能直火加热或高温烘烤。 比色、比浊操作要注意平行原则，即样品与标准须同时进行试验，加入试剂的量、顺序，放 置时间，稀释程度等均应一致。在比色管中加入试剂后，要求旋摇均匀，即用手指握住比色 管上端，利用手腕旋转的惯性使比色管向四周作圆锥形旋摇。观察方式，比浊时以黑色为背 景，比色时以白色为背景，使两管受到的光线照射程度一致。让光线从正前方射入向上反射， 由上而下垂直观察，比较样品管与标准管的浑浊或颜色深浅程度。2. 正确选用量器 在杂质检查中允许的误差为10%，量筒的绝对误差为1毫升至数

9、毫升， 刻度吸管的绝对误差为0.010.1mL,药物天平的绝对误差为0.1g。在实验中，应根据样品、 标准液的取用量，正确选用量器。例：取标准液2mL，允许的误差为：X/2X100%=10%， X=0.2mL，故应选择刻度吸管吸取标准液。取样品2g,允许的误差为0.2 g，可选用药物天 平称取。3. 葡萄糖铁盐检查时，采用硝酸氧化Fe2+Fe3+,不再加过硫酸铵，标准液与样品液同法操 作。样品液加硝酸煮沸时，采用小火，注意爆沸，必要时补充适量水。4. 重金属检查时，若样品液有色，需用稀焦糖溶液调节标准液颜色。稀焦糖溶液的制备： 取蔗糖置烧杯中，用小火加热使成焦状，然后加水溶解，取上清液备用。根

10、据供试品溶液的 颜色深浅，掌握加热程度和加水稀释程度，随加热温度与时间的不同，得到的水溶液呈黄、 褐或棕黑色。标准管中加入的稀焦糖溶液量一般控制在12滴。5葡萄糖砷盐检查时采用湿法破坏，在酸性溶液中用溴进行有机破坏使砷游离。有机破坏在 小烧杯中进行，20分钟内要保持过量的溴存在，随时补充消耗的溴化钾溴试液，使溶液呈 黄色，20分钟后要将多余的溴除尽，使溶液无色。6选择配对的测砷瓶和测砷管，加砷粒前按装好醋酸铅棉花和溴化汞试纸，醋酸铅棉花的填 塞松紧度、长短要适宜，溴化汞试纸应盖住测砷管孔，并盖紧盖子，勿使漏气（示范）。加 砷粒后必须立即塞紧测砷管，在规定温度下反应1小时。7比较氯化钠和葡萄糖中

11、杂质限度检查的几种方法。附录A. 氯化物检查法标准氯化钠溶液的制备：精密称取干燥至恒重的氯化钠0.165g，置lOOOmL量瓶中，加 水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液OmL，置100mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于10p g Cl的标准溶液。干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份 中加硝酸银试液l.OmL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清， 再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶 液；另一份中加硝酸银试液l.OmL与水适量使成50m

12、L，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述 方法与对照溶液比较，即得。用滤纸滤过时，应预先用含有硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤。B. 硫酸盐检查法标准硫酸钾溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硫酸钾0.181g，置lOOOmL量瓶中，加 水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于100p g S04的标准溶液。干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份 中加25%氯化钡溶液5mL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清， 再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，作为对照溶液；另 一份中加25%氯化钡溶液5mL与水

13、适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，按上述方法与对照 溶液比较，即得。C. 重金属检查法标准铅溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置lOOOmL量瓶中，加硝酸 5mL与水5OmL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液1OmL， 置1OOmL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于1Op g Pb的标准溶液。干扰的排除：若供试液带颜色，可在标准管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有 色溶液，使之与样品管颜色一致。如在标准管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取 该药品项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成3OmL，将

14、溶 液分成甲乙二等份，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25mL；甲管中加入硫代乙 酰胺试液2mL，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3mm）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液 一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25mL ；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液2mL， 甲管中加水2mL，依法比较，即得。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。D. 砷盐检査法仪器装置：A为1OOmL标准磨口锥形瓶（测砷瓶）；B为中空的标准磨口塞，上连导气 管C； D为具孔的有机玻璃旋塞，E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖。测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花6Omg （装管高度6O8Omm），再于旋塞D的顶端 平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖E 并旋紧，即得。标准砷溶液的制备：精密称取干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置lOOOmL量瓶中， 加20%氢氧化钠溶液5mL溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL,用水稀释至刻度, 摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置lOOOmL量瓶中，加稀硫酸10mL, 用水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于1Mg As的标准溶液。