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1、一糖发酵试验1. 原理由于各种细菌所含酶类的不同，故对糖（醇）的分解能力不同，其代谢产物也不一样。有的细菌能分解某些糖而产酸和产气，有些细菌能分解某些糖只能产酸，还有一些细菌因缺乏某些糖分分解酶则不能分解某些糖类。细菌对糖的不同分解能力可用来鉴别细菌。2. 方法将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，3C培养小时观察结果。3. 结果观察结果时，首先确定细菌是否生长，细菌生长则培养基呈混浊状态，再确定细菌对糖的分解情况。（1不）分解糖：培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“-”表示。（2）分解糖只产酸不产气：培养基中所含的指示剂（溴甲酚紫）由紫色变为黄色，液体培养基的倒置管中未发现
2、气泡。若为半固体培养基，则培养基内未见气泡或琼脂断裂，记录是以“+”表示。（3）分解糖既产酸又产气：除培养基中的指示剂颜色改变外，在液体培养基的倒置小管中出现气泡，若为半固体培养基，则培养基内可见气泡或琼脂断裂，记录时以“”表示。本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气“”，伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“+”，不分解乳糖“-”。二.甲基红试验（试验）1. 原理某些细菌发酵葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，使培养基的下降至以下，此时加入甲基红指示剂后培养基呈现红色反应邙日性）。有些细菌分解葡萄糖产生酸进一步转化为醇、醛、酮等非酸物质，使培养基的在以上，加入甲基红指
3、示剂呈黄色（阴性）。2. 方法将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，经培养小时,观察结果。3. 结果在培养物中加入甲基红指示剂滴，立即观察，呈现红色为阳性，黄色为阴性。本实验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。三 试验原理有些细菌在发酵葡萄糖产生丙酮酸后，使丙酮酸脱羧，形成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境中被空气中的氧气氧化为二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应，生成红色反应物。若在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸或肌酐，可加速反应。方法将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，经C培养小时，与培养基中加入试剂，混匀后观察结果。结果如立即或数分钟内出现红
4、色为阳性,若为阴性应将试管置C小时后再进行观察,仍无红色者为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。四 靛基质试验（吲哚试验）1原原理某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质（吲哚），后者与二甲基氨基苯酚作用，形成红色的玫瑰靛基质（玫瑰吲哚）。方法将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于蛋白胨水中，经培养小时，观察结果。3原结果在培养物中沿管壁加入靛基质试剂数滴，静置半分钟，使成两成，两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。本试验大肠埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。五.硫化氢生成试验原理有些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢（）。2当培养基含有铅
5、盐或铁盐时，硫化氢可与其反应生成黑色发热硫化铅或硫化亚铁沉淀。方法将大肠埃细菌与普通变形杆菌分别穿刺接种到醋酸铅培养基中，C培养小时，观察结果。结果培养基变黑为阳性，不变色为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，普通变形杆菌为阳性。六尿素分解实验1原理能产生尿素酶的细菌，能分解尿素生成氨和C02，氨在溶液中形成碳酸铵，使培养基变碱性，酚红指示剂呈红色。2方法将大肠埃希菌和普通变形杆菌分别接种于尿素培养基中，C培养小时，取出观察。3方结果培养基呈红色反应为阳性；不变色为阴性。本试验大肠埃希菌为阴性，普通变形杆菌为阳性。七枸橼酸盐利用试验1原理某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的
6、铵盐（如磷酸二氢铵）作为唯一氮源。细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生的碳酸钠和分解氨盐生成的氨（NH3），均能使培养基变碱，使溴麝香草酚蓝PH指示剂由淡黄色变为深蓝色。2方法将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于枸橼酸盐培养基上，C培养小时，观察结果。3结果培养基呈深蓝色反应者为阳性，阴性者培养基中无细菌生长，仍为绿色。本试验大肠埃希菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。靛基质（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）四种试验常同时用于鉴定大肠埃希菌和产气肠杆菌，合称为IMViC试验操作可按下表进行生化反应接种实验名称接种菌种丄卄氓甘培养基葡糖糖发酵试验大肠杆菌、伤寒沙门菌军葡萄糖发酵管乳糖发酵试验大
7、肠杆菌、伤寒沙门菌军乳糖发酵管靛基质试验大肠埃希菌、产气肠杆菌蛋白胨水甲基红试验大肠埃希菌、产气肠杆菌葡萄糖蛋白胨水V-P试验大肠埃希菌、产气肠杆菌葡萄糖蛋白胨水枸橼酸盐利用试验大肠埃希菌、产气肠杆菌枸橼酸盐培养基尿素分解实验大肠埃希菌、普通变形杆菌尿素培养基硫化氢生成试验大肠埃希菌、普通变形杆菌醋酸铅培养基常见的细菌生化反应试验各种细菌具有各自独特酶系统，因而在代谢过程所产生的分解和合成也不同，这些分解或合成代谢产物又具有不同的生化特点。利用生物化学的方法来检查这些代谢产物以鉴别细菌，成为细菌的生化反应试验。细菌生化试验的种类和方法很多，但归纳起来，主要由以下几类：一糖（醇）类代谢试验（一）
8、糖（醇）类发酵试验（见第二章）（二）糖氧化发酵（O-F）酵试验该试验是由Hugh和Leifson创立，故又称Hugh-Leifson（HL）试验。【原理】细菌对糖的代谢，分为氧化和发酵2种类型。细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加，称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。发酵性细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。在有氧或无氧环境中都不能利用葡萄糖的细菌，称为产碱型。利用此试验可区别细菌的代谢类型。葡萄糖的氧化/发酵试验又称O/F试验或Hugh-Leifson（HL）试验。【培养基】Hugh-Leifson（HL）培养基【方法】取两支HL培养管，煮沸10分钟以驱逐培养基中的氧气。冷却后将被检细菌接种到2支培养基中，其中一支加灭菌的液体石蜡或凡士林厚约lcm,3C培养天，观察结果。【结果】2管均不产酸（不变色）为产碱型；2管均产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。（三）甲基红（）试验（见第二章）（四）试验（见第二章）
