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1、人前心钠肽（Pro-ANP）elisa试剂盒利用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：x 1瓶酶标试剂：3 ml X 1 瓶（48） /6 ml X 1 瓶（96）【人前心钠肽（Pro-ANP） elisa试剂盒】本试剂仅供研究利用以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在座标纸上绘出标准曲线，依照样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒组成：封板膜：2片（48） /2片（96）说明书：1份密封袋：1个标准品：2
2、700ng/L X 1瓶 x 1瓶2-8 C保留酶标包被板：1X481X 962-8 C保留样品稀释液：3ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保留显色剂A液:3ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保留显色剂B液:3ml x 1 瓶6 ml x 1 瓶2-8 C保留终止液：3ml x 1 瓶6ml x 1 瓶2-8 C保留浓缩洗涤液：（20ml X 20倍）X 1瓶 （20ml X 30倍）X 1瓶 2-8C保留 实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人前心钠肽（Pro-ANP）水平。用纯化的人前心钠肽（Pro-ANP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依
3、次加入前心钠肽 （Pro-ANP）,再与HRP标记的前心钠肽（Pro-ANP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的前心钠肽（Pro-ANP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人前心钠肽（Pro-ANP）浓度。目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中前心钠肽（Pro-ANP）的含量。效劳许诺： 供货期：款到发货。 工作时刻内免费的技术咨询和指导。请来电咨询为客户提供来样检测效劳，最大限度实验结果的有效性（免费代测）
4、。保留条件及有效期：试剂盒彳留：2-8 C |有效期：6个月【人前心钠肽（Pro-ANP） elisa试剂盒】样本处置及要求：1 .血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上 清，保留进程中如显现沉淀，应再次离心。2 .血浆：应依照标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应该再次 离心。3 .尿液：用无菌管搜集，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参如实行。
5、4 . 细胞培育上清：检测分泌性的成份时，用无菌管搜集。离心20 分钟左右（ 2000-3000 转/分） 。认真搜集上清。检测细胞内的成份时，用PBS （）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分钟左右 （ 2000-3000 转 /分）。认真搜集上清。保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。5 . 组织标本：切割标本后，称取重量。加入必然量的 PBS， 。用液氮迅速冷冻保留备用。标本融化后仍然维持2-8 的温度。加入必然量的 PBS（） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分） 。认真搜集
6、上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6 . 标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行实验，可将标本放于-20 保留，但应幸免反复冻融.7 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中别离加标准品100出然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50 4,混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100 d别离加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔别离加标准品稀释液50小混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50M弃掉，再各取50 M别离加到第五、第六孔中，再在第
7、五、第六孔中别离加标准品稀释液50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50 M别离加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中别离加标准品稀释液50出混匀后从第七、第八孔中别离取50 M加到第九、第十孔中，再在第九第十孔别离加标准品稀释液50 口，混匀后从第九第十孔中各取50 M弃掉。（稀释后各孔加样量都为50小浓度别离为 1800ng/L ， 1200ng/L ， 600ng/L ， 300ng/L ， 150ng/L）。2. 加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40小 然后再加待测样品10 U （样品最终
8、稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37 温育 30 分钟。4. 配液：将 30（ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 （ 48T 的 20 倍）倍稀释后备用。5. 洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50 口，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50U,再加入显色剂 B50M,轻轻震荡混匀，37c避光显色15 分钟 .10 .终止：每孔加终止液50闻终止反映（现在
9、蓝色立转黄色）。11 . 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值） 。 测定应在加终止 液后 15 分钟之内进行。【人前心钠肽（Pro-ANP） elisa 试剂盒】 注意事项：1 试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30 分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。2 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。3 各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。一次加样时刻最好操纵在 5 分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量太高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释必然倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（X n X 5）。5 封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。6 底物请避光保留。7 严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.8 所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。9 本试剂不同批号组分不得混用。10 . 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。试剂盒性能：1 .样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为以上。2 .批内与批见应别离小于9%和 11%检测范围：L - 6IU/L
