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1、细胞迁移实验技术划痕实验一、基本原理细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法， 类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞 上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央 部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h）,取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此 判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实 验组是加了某种处理因素或药物、 外源性基因等的组别，通过不同分 组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修 复能力。二、操作步骤1 .先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均
2、匀的划横线， 大约每隔0.51cm 道，横穿过孔。每孔至少穿过 5条线。2 .在孔中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不 同，接种原则为过夜后融合率达到 100%。3. 第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头 要垂直，不能倾斜（不同孔之间最好使用同一只枪头）。4. PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。5. 放入37C 5% CO2培养箱，培养。可按0, 6, 12, 24h时间 点取样，拍照（具体时间依实验需要而定）。6统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条 水平线，计算细胞间距离的均值。口dlbprkcjJ ar hmsh 匕
3、血灰皿(riqln do in swtianiliradMs Ed* image Frocks Maly Plugms Wido* He如File Effll.PincSSS- AiiaJ怦 PUgthi Window Help1-1086 P-21D Ub-11T 117 11T厂 Random QTmIneOCCaihrp ：5OS)JGiidT nw. mrmFTHIHw： ptf Pel nr IWT3D22637000护CCOLhnip |5D%.|时E3 |Mfl3StdDev iMDdw Mill 加爭 |则!jIeKurt JRtsjhtFite E(3I l-ant hbsu
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