《淀粉酶与过氧化氢酶》由会员分享，可在线阅读，更多相关《淀粉酶与过氧化氢酶（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细菌淀粉酶和过氧化氢酶定性实验及其生化特征观察一、实验目的通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定，加深对酶和酶促反应的感性认识二、实验原理酶是微生物机体内生物合成的一种生物催化剂，它是高分子蛋白质，具有催 化生物化学反应加速进行，并具有传递电子、原子和化学基团的作用。微生物的 酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶及表面酶。本实验对胞外酶中的两种 即淀粉酶和过氧化氢酶（亦叫接触酶）进行定性测定。细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化 为糖，淀粉被酶催化分解后用碘检测不到其变色现象；过氧化氢酶能将过氧化氢 快速分解为水和氧气，能用肉眼很容易的观测到产生的气泡。三、仪器和材
2、料1、试管（1 5 mm-1 50 mm）4支、试管架1个、培养皿（90mm）3套、接种环。2、肉膏胨、淀粉琼脂培养基1 瓶（约50 ml）3、0.2淀粉溶液 1 滴瓶、革氏碘液 1 滴瓶、 10-3过氧化氢1 滴瓶。4、生活污水活性污泥混合液或枯草杆菌培养液一瓶。枯草杆菌和大肠杆菌 斜面各一支。四、实验内容和操作方法（ 一 ） 生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的测定1取4支干净的试管，按1、 2、 3对照编号。放在试管架上备用。2在 1 号、 2 号、 3 号试管内分别加入 5ml、 10ml、 15ml 的活性污泥混合 液，再在1号和2号试管中分别加10 ml和5 ml蒸馏水。在对照管内加1
3、5 ml 蒸馏水。3. 在1号、2号、3号及对照管中分别加入O. 2%的淀粉液若干滴（淀粉液 的用量，在做预备实验时根据样品中淀粉酶含量多少而定），迅速摇匀并记下反 应的初始时间。4. 在上述 4 个管内分别加若干滴碘液（碘液用量在预备实验时酌定），迅速 摇匀，这时各管均呈蓝色。5观察结果。注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失时的时间（即淀粉酶 和淀粉反应完全的时间），并对结果进行分析。（二）细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验1将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45C左右倒人无菌培养皿内 （每皿约10 ml），共倒3个，静置待冷凝即成平板。2在无菌操作条件下，用接种环分别挑取枯草杆菌、大肠
4、杆菌和活性污泥各一环分别在3个平板上点种5个点。倒置于37C恒温箱内培养2448 h。3观察结果，取出平板，分别在 3 个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落 周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并 扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝色，说明该细菌不产生淀粉酶。（三） 过氧化氢酶的定性测定1将配备的枯草杆菌和大肠杆菌斜面各1支放在试管架上。2用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上，有气泡产生的为接触酶阳 性（有过氧化氢酶）；无气泡产生的为接触酶阴性（无过氧化氢酶）。五、实验结果把所观察到的现象记录下来，进行分析。枯草杆菌中加入过氧化氢酶大肠杆菌中加入过氧化氢酶大肠杆菌中滴加碘液枯草杆菌中滴加碘液活性污泥中滴加碘液活性污泥混合液中淀粉酶的测定六、思考题1淀粉酶定性测定中对照应呈什么颜色 ?为什么?各菌落呈什么颜色 ?为什 么?2各菌落滴加过氧化氢后呈什么现象?说明什么问题?
