加热沉淀蛋白质实验报告

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1、竭诚为您提供优质文档/双击可除加热沉淀蛋白质实验报告篇一：蛋白质的沉淀和变性实验蛋白质的沉淀与变性反应目的(1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原 理及它们的相互关系。(2)学习盐析和透析等生物化学的操 作技术。原理在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双 电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类 似。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。 在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水， 甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白 质的沉淀反应。这种反应可分为以下两种类型:一、可逆淀汲反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，

2、但它的分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后， 能再溶于原来的溶剂中。这种作用称为可逆沉淀反应，又叫 作不变性沉淀反应。属于这一类的反应有盐析作用;在低温 下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉 淀等。二、不可逆沉淀反应 在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭 到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白 质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀 反应。重金属盐、植物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、 超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。试剂和器材一、试剂1蛋白质溶液取 5m1 鸡蛋蛋白蛋清，用蒸馏水稀

3、释至 100ml ，搅拌均 匀后用 4-8 层纱布过滤，新鲜配制。2蛋白质氯化钠溶液取 20ml 蛋清，加蒸馏水 200ml 和饱和氯化钠溶液 100ml 充分搅匀后，以纱布滤去不溶物（加入氯化钠的目的是溶解 球蛋白）。硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液，3%硝酸银，0.5%醋酸铅，10%三氯醋酸，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5%磺基水杨酸(sulfosalicyclicacid) , 0.1%硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1%醋酸， 10%醋酸，饱和氯化钠溶液， 1 0%氢氧化钠溶液。二、器材试管，试管架，小玻璃漏斗，滤纸，玻璃纸，玻璃棒， 500ml 烧杯， 10ml 量筒。操作方法一、蛋白质的可逆沉淀

4、反应蛋白质的盐析作用 用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称为 蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐 影响下，蛋白质分子被盐脱去水化层，同时蛋白质分子所带 的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭受破坏而沉淀析 出。析出的蛋白质仍保持其天然蛋白质的性质。减低盐的浓 度时，还能溶解。沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同，而盐类不同 也有差异。例如:向含有白蛋白和球蛋白的鸡蛋清溶液中加 硫酸镁或氯化钠至饱和，则球蛋白沉淀析出。加硫酸钱至饱 和，则白蛋白沉淀析出。另外，在等电点时，白蛋白可被饱 和硫酸镁或氯化钠或半饱和的硫酸铵溶液沉淀析出。所以在 不同条件下，用不同浓度的盐类可将

5、各种蛋白质从混合溶液 中分别沉淀析出，该法称为蛋白质的分级盐析。目前在腌的生产和制备、科学研究工作和临床化验等工作中广泛应用。取一支试管加入 3m1 蛋白质氯化钠溶液和 3m1 饱和硫酸 铵溶液，混匀，静置约10min,球蛋白则沉淀析出，过滤后 向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末 不再溶解，达到饱和为止。析出的沉淀为白蛋白。静置，倒 去上部清液，白蛋白沉淀，取出部分加水稀释，观察它是否 溶解，留存部分作透析用。二、蛋白质的不可逆沉激反应 1重金属沉淀蛋白质重金属盐类易与蛋白质结合成稳定的沉淀而析出。蛋白 质在水溶液中是酸碱两性电解质，在碱性溶液中（对蛋白质 的等电点而言），蛋

6、白质分子带负电荷，能与带正电荷的金 属离子结合成蛋白质盐。在有机体内，蛋白质常以其可溶性 的钠盐或钾盐的形式存在，当加入汞，铅、铜、银等重金属 盐时，则蛋白质形成不溶性的盐类而沉淀。经过这种处理后 的蛋白质沉淀不再溶解于水中，说明它已发生了变性。重金 属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类 存在时。因此，生化分析中，常用重金属盐除去体液中的蛋 白质;临床上用蛋白质解除重金属盐的食物性中毒。但应注 意，使用醋酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时，试剂不可加过量， 否则可使沉淀出的蛋白质重新溶解。取 2 支试管，各加入约 1m1 蛋白质溶液，分别加入 3% 硝酸银 3-4 滴， 0.5%醋酸铅

7、1-3 滴和 0.1%硫酸铜 3-4 滴，观 察沉淀的生成。第一、二支试管再分别加入过量的醋酸铅和 饱和硫酸铜溶液，观察沉淀的再溶解。2有机酸沉淀蛋白质有机酸能使蛋白质沉淀。三氯醋 酸和磺基水杨酸最有效，能将血清等生物体液中的蛋白质完 全除去，因此得到广泛使用。取两支试管，各加入蛋白质溶液约05ml,然后分别滴 加 10%三氯醋酸和 5%磺基水杨酸溶液各数滴，观察蛋白质的 沉淀。3无机酸沉淀蛋白质 浓无机酸（除磷酸外）都能使蛋白质发生不可逆的沉淀 反应。这种沉淀作用可能是蛋白质颗粒脱水的结果。过量的 无机酸（硝酸除外）可使沉淀出的蛋白质重新溶解。临床诊断 上,常利用硝酸沉淀蛋白质的反应,检查尿

8、中蛋白质的存在。取 3 支试管,分别加入浓盐酸 l5 滴,浓硫酸、浓硝酸 l0 滴。小心地向 3 支试管中,沿管壁加入蛋白质溶液 6 滴, 不要摇动,观察各管内两液界面处有白色环状蛋白质沉淀出 现。然后,摇动每个试管。蛋白质沉淀应在过量的盐酸及硫 酸中溶解。在含硝酸的试管中,虽经振荡,蛋白质沉淀也不 溶解。4加热沉淀蛋白质几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固,变成不可逆的 不溶状态。盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有重要影响 少量盐类促进蛋白质的加热凝固。当蛋白质处于等电点时， 加热凝固最完全、最迅速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分 子带有正电荷或负电荷，虽加热蛋白质也不会凝固。若同时 有足量的中

9、性盐存在，则蛋白质可因加热而凝固。取 5 支试管。编号，按下表加入有关试剂(单位:滴):将各管混匀，观察记录各管现象后，放人沸水浴中加热10min,注意观察比较各管的沉淀情况。然后将第3, 4, 5号管分别用 10%naoh 或 10%醋酸中和，观察并解释实验结果。将 3, 4, 5 号管继续分别加入过量的酸或碱,观察它们 发生的现象。然后,用过量的酸或碱中和第 3, 5 号管,沸 水浴加热10min,观察沉淀变化，检查这种沉淀是否溶于过 量的酸或碱中,并解释实验结果。问题:1 为什么蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂 ?2蛋 白质分子中的哪些基团可以与(1)重金属离子作用而使蛋白 质沉淀?(2

10、)有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀?3高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么?4在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质 氯化钠溶液?篇二：实验一蛋白质的沉淀与凝固II实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有 二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团； 二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒 之间起了隔离作用。如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被 破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类： 第一类是可逆的沉淀反应。这时蛋白质的空间构象未受 到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析

11、和 低温乙醇沉淀蛋白。第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂 沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于 水中。不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。变性的 蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成 坚实的凝块。一、蛋白质的盐析原理高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又 是强电解质，可抑制蛋白质的解离。因而用高浓度的中性盐， 使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。盐 析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐 的浓度也不相同。例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的 硫酸铵则沉出

12、清蛋白。操作1. 取一试管，加入3ml5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵 溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。2. 将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱 和状态，摇匀后观察现象。（注意固体硫酸铵若加到过饱和 则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。）3. 取上项浑浊液 1ml， 加水2ml,观察是否复容。二. 乙醇沉淀蛋白质原理乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙 醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。 故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特 性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可 使之变性，形成不

13、可逆的沉淀。 操作1. 取试管 4 支，标出 1、2、3、4 号码，按下表操作试 剂5%蛋白质溶液（ml）1%乙酸（滴）95%乙醇（ml）11-211-2-31-4-22. 将 3 管及 4 管置冰水中，放置 5 分钟，然后将第 4 管 的冰乙醇倒入第 3 管中（此步最好在冰水中进行），混匀， 同时向第 1 及第 2 管中各加入未冰浴的乙醇 2ml 混匀，观察 各管的沉淀情况并立即向第 1、2 及 3 管中各加入蒸馏水 10ml 混匀，比较各管变化并解释之。三. 重金属盐沉淀蛋白原理在溶液的 ph 值大于蛋白质的等电点时，带负电荷的蛋 白质与重金属离子（ca2+、hg2+、Agl+、pb2+等

14、）结合成盐 而沉淀。操作取试管 4 支，按下表操作。试剂（滴） 5%蛋白质溶液 1% 乙酸 10g/L 硫酸铜 30g/L 硝酸银15-325-3351034510-3混合均匀，比较各管浑浊程度并解释之。四. 生物碱试剂沉淀蛋白原理能沉淀生物碱（或植物碱）或与其产生颜色反应的物质 称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。在溶液的 ph 值小于蛋白质的等电点时，带正电荷的蛋 白质与生物碱试剂的负离子结合成盐而沉淀。操作取试管3支，按下表操作。试剂5%蛋白质溶液（ml） 1% 乙酸（滴）苦味酸溶液（滴）鞣酸溶液（滴）三氯乙酸溶液 （滴）1110 数滴-2110-数滴-3 1 10-数滴混合均匀，

15、比较各管浑浊程度并解释之。五. 蛋白质的加热凝固原理蛋白质在其等电点附近加热，即发生变性凝固，在加热 过程中，随着蛋白质变性作用的深化，使已变性的蛋白质分 子间凝聚成凝胶状的蛋白块。但应注意，当蛋白质溶液远离 等电点而带有很多同种电荷时，加热虽可使其变性，但因同 种电荷的排斥作用并不发生凝固现象。 操作取试管 4 支，按下表操作试剂5%蛋白质溶液（ ml） 1%乙酸（滴） 10%乙酸（ ml） 100g/Lnaohml )12-221-2-32-0.542-0.5混匀后各管分别加热，观察有否沉淀析出及沉淀析出的 多少、快慢并解释之。另外在第 2 管加热蛋白沉出后再加 入 5ml 蒸馏水，观察是否复溶，为什麽？ 试剂15%蛋白溶液：取出鸡蛋清用蒸馏水稀释 5 倍，搅匀 后用纱布过滤。 2饱和硫酸铵溶液。 3硫酸铵结晶粉末。 495%乙醇。51%乙酸和 10%乙酸。630g/L硝酸银溶液。7. 10g/L硫酸铜溶液。8. 100g/L 氢氧化钠溶液。9.苦味酸饱和溶液及鞣酸饱和溶液。 10. 100g/L 三氯 乙酸溶液。（李素婷）实验三微量凯氏定氮法原理蛋白质样品与浓硫酸共热时，分解出氮、二氧化碳和水， 而氮转变为氨，氨