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1、硅胶的预处理我们以浓盐酸浸泡硅胶14 小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶 4次后，将起进行减压抽滤，后不断加 蒸馏水冲洗。在1 小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。经过4 小时不断的冲洗才使得抽 滤液中基本不含氯离子。晾干一周后，在110C烘箱中活化2小时。活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于 层析柱上部， 注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成 断层（这一步是实验的关键步骤）。装柱装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法， 硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并
2、且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分 离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂走柱子，本法 最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然 后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂 走柱子，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下 面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于走柱子时，由于溶剂和硅 胶之间的吸
3、附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时 如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在 上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过， 当然也就谈不上分离了。解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、 一定要用较多的溶剂走 柱子，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我 的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶
4、解后，在加入少量硅胶，拌匀 后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。 湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂， 但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量 芗 洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法 推荐一种将硅胶柱装得均匀又密实的方法 -非常实用硅胶柱装不好,主要出现的问题有疏密不均匀和不够密实,假如是比较大的柱,在溶剂进入硅胶柱后, 极易造成硅胶柱体出现断裂,影响分离效果.解决办法是先在层析柱下面的溶液出口处接上真空泵连接 管,开启真空泵,
5、将预备好的硅胶倒入空层析柱中.硅胶倒入的速度不要太快,加完硅胶后要抖动柱子,以 使顶部的硅胶形成平面，待硅胶不再向下收缩为止,u 关掉层析柱出口处的阀或封闭真空泵连接管，在 硅胶柱内气压平衡后,/u 取掉真空管即可也可以先把硅胶全部装入柱中再抽真空，但这样效果要差些. 我一直采用此法装柱,效果很好.谢谢!用在树脂柱上可以吗？ 没有真空泵怎么办啊？呵呵 我一般直接装，用洗耳球猛敲柱子，决对放心，不会敲破的。装填的效果也不错。 还得要赞一下，LZ太牛B 了，这样的方法也想出来，值得学习。佩服！ 这样很好的，我一直就是这么装的，科学院系统都着样的 同“加压柱”类似 这样装柱是很方便， 可是也会出现问
6、题，就是“太实”了，可能导致流动相速度太慢（加相同压力比较）。我们实验室采取的方法是，先倒入需量的硅胶，然后在地面放本书，把柱子“掂”实，手法熟练的话， 最终得到的柱子表面中间一点儿突起，边缘稍低，放平后，硅胶还能保持那种状态。当然，这个也看硅胶本身质量的，我也碰到过怎么都“掂”不实的，就借助减压泵抽一下（前提是 先把硅胶“掂”平），但不会抽到柱子高度降到最低，那样影响流速，也会影响洗脱效果。我建议从以下几个方向考虑对分离度产生的影响1，是大硅胶柱还是小硅胶柱，长柱还是短柱，粗分还是细分 2，多少目的硅胶3，上样量的大小， 4，干法上样还是湿法上样5，干法装柱还是湿法装柱6，用什么洗脱系统洗脱
7、，7，拌样量的大小 我先就第一点稍微说一下，抛砖引玉，后面的人可以就其它点说一说，也可以提出不同意见，都予以 重奖。天然产物分离，首先考虑的是样品量也就是浸膏的多少，直接决定了你用大柱还是小柱，大柱用 来粗分，小柱用来细分，大柱和小柱没有绝对的区别，一般认为500克装柱量的硅胶柱可以认为是大 柱，100500可的装柱量可以认为是中柱，50可以下可以认为是小柱500克以上大柱一般用来粗分，看你的样品量来决定装柱量，装柱硅胶太多，分离效果固然不错， 可是柱子大了那里有地方放呢，也不一定有那么大的玻璃柱阿（大玻璃柱是相当贵的，装2公斤的硅 胶的玻璃柱的价格要一两千），溶剂耗费也大大增加，蒸馏所耗费的
8、功夫也大大增加，操作人也越累， 耗时也越久。所以装柱量并不是越大越好，这里要考虑到综合消费比的问题 当然，显而易见，装柱硅胶量太少也是不行的，必须要有一定量的硅胶才能起到分离效果阿， 试想一下，如果一根柱子只有拌样硅胶，能有分离效果吗。 我的经验装大柱，讲究“粗放，快速”，柱径比在10：1左右的大玻璃柱较为适宜。硅胶和样品量的 比值是1020：1为宜，装柱硅胶长度比拌样硅胶多一倍就可以了，当然如果你耗的起，装长点自然 更好。用的硅胶自然是200300目的，当然你可以试试100200目的硅胶，效果并不差 装小柱和装大柱就不一样了，小柱讲究小而精，想想看，你的样品已经快纯了，装柱能不精益求 精吗？
9、所以说，装小柱的硅胶和样品量的比值是最好在50：1到100：1，当然有人喜欢大的硅胶量， 1000：1的也有。和和，看你自己的习惯了柱径比在7：1左右，有人喜欢装一根超短粗柱，也有人喜欢超细长柱（比如我师兄），也是看 你的习惯，时间长了你就知道各种类型柱子的优缺点了找一根玻璃珠，填好棉花，直接加入硅胶，用硅胶H最好，使劲在硬物上墩，敦实以后，你会发 现即使倒过来，硅胶也不会撒出来，这就到火候了。柱面不用说当然得是平的。加入你的拌样硅胶就 可以了。最后再次敦实即可湿柱怎么装？不用多讲了吧？注意不要太浓，溶剂多放点，稀点好，让它慢慢流，最后留点洗脱液，加入拌样硅胶就可以了柱层析极性小的用乙酸乙酯：
10、石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。1。称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶Ho干硅胶 的视密度在0. 4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮 体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含 水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干 燥
11、。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱 下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其 冲入柱中。4。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至 9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由 于柱床萎缩产生开裂。5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近 硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱
12、剂，而不会冲坏硅胶表面。6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗 脱。收集的例子：10mg 上样量，1g硅胶H, 0.5ml收一馏分；1-2g 上样量，50g硅胶（200-300目）， 20-50ml收一馏分。7。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显 剂底1-2个数量级。8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱， 作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。1先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化2.将柱子必
13、须装平整、均匀3. 考虑有限柱填料的吸附量 4.可考虑用剃度法分开并洗脱 关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是 样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二 厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只 有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多 的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说， 不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。现在见到的柱子径高比一般在1： 510,书中写硅胶量是样品
14、量的3040倍，具体的选 择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.20.4,杂质 相差0. 1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cmX20cm的柱子 ）;如果相差不到0.1,就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也 可以减小淋洗剂的极性等等。真空液相层析即vacuum liquid chroma to graphy（VLC）,即用真空代替压力进行层析，具体方法 可见 Synthesis,2001,No,16,2431-,and J chem edu,1997,10,1222- 干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品
15、用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶， 晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的 硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相 的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望 能有所帮助。柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅
16、胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过 硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得 不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过 减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念 头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力 的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解 的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得 加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。 可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和 时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏
