《流动相组成对保留值的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《流动相组成对保留值的影响（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、流动相组成对丹皮酚保留值的影响一、目的要求1、掌握流动相组成对保留值的影响。2、熟悉高效液相色谱仪的使用。二、仪器与试剂仪器：LC-20AT型高效液相色谱仪，超声清洗器，超纯水器，微孔滤膜，微量进样器，注射器， 试剂：甲醇（色谱纯），超纯水。丹皮酚样品（药学系学生天然药物化学实验提取），丹皮酚标准品 （中国生物制品检验中心购买）三、方法原理在反相高效液相色谱法，流动相的极性总是大于固定相的极性，固定相最常用的是非极性的十八烷基 硅烷键合硅胶，而可做流动相的溶剂种类则很多。并且可以组成不同配比的二元或多元溶剂系统。反相高 效液相色谱法中流动相极性增大，洗脱能力降低；流动相极性减小，洗脱能力增强。
2、四、色谱条件色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 色谱柱（150 X4.6mm ）流动相：甲醇-水流速： 1ml/min检测器： SPD-20A五、操作步骤1. 开机准备 流动相按要求用过滤装置过滤，超声脱气30分钟。 用流动相配制一定浓度的样品和标准品（浓度相近），用微孔滤膜过滤。2.开机打开泵A和泵B的电源开关，将排液阀逆时针旋转180按purge，灯remote亮，液晶显示purging line， 等待，此时仪器自动排除气体；待液晶显示ML、AX20.0、MPA、MIN0.0时，排气结束，将排液阀 顺时针旋转180，按pump键，灯pump亮。 打开检测器电源开关，仪器
3、自检，待液晶显示nm OVER，自检结束。 打开电脑主机和显示器。3. 方法设置双击LC-solution （如要求填写密码，直接点击“确定”）双击“分析”进入实时分析页面，左上方显示“LC：就绪”，窗口下方点击“正常”“简单设置”-时间程序0.01min （默认）；泵：“等浓度洗脱”，设泵A （水）：0.3ml/min、泵B （甲 醇）：0.7ml/min；（注：泵A、泵B流速之和为总流速），（或“二元高压”，总流速L0min, B泵70% ）。 波长通道：274nm。结束时间20min。点击“文件”-“另存方法文件”-起文件名保存。4. 样品检测 助手栏点击“单次运行”-填样品名，选择方法
4、文件，填数据文件名称，自动递增丁，进样体积20 “1,确定。将进样器手柄向下推inject，插针；进样器手柄向上拉load，推入样品（注意防止气泡进入），然后将 进样器手柄向下推inject，分析自动开始。数据自动保存。注意：仪器运行开始后，将针头插入进样器中，同时盖好红色的保护帽。 将当前方法文件中的流速比例调整为40： 60和50： 50，各测定一次。记录数据。 注意：每次更改条件后，必须点击“下载”。 在甲醇：水=60： 40的流动相条件下测定标准品的保留时间，与相同条件下测定的样品比较定性。六、数据记录流相配比.甲醇-水） 参数80： 2070： 3060： 40tR (min)七、思考题1、什么是反相色谱？其最常用的固定相和流动相是什么？2、反相液相色谱法中，组分保留值的大小与组分的极性及流动相的极性有什么关系？
