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1、尿碘快速定量试剂盒检测与国标法的对比雷航琪 杨志琼 朱万明 万衍 罗燕 冯鑫(乐山市疾控预防控制中心乐山614000)碘是人体必须的微量元素，当摄入不足时人体会出现一系列的问题，导致所谓的“碘缺乏病”，特别是孕妇和儿童缺碘后会引起严重的后果。尿碘是反应人体碘营养水平的重要指 标，要想知道人体的碘营养状况，检测尿碘是较为直接的方法。尿碘检测目前实验室所采用的方法是神铺催化分光光度法(WS/T107-2006)。该法是目前测定尿碘的国标方法，该方法的灵敏度高、准确度高，但由于尿碘含量很低且测定受多种因素干扰影响，外界环境的温度、湿度以及检测人员的操作都直接影响检测结果的准确性。国标方法规定的操作较
2、为复杂，时间控制严格，需多人配合完成。现市场上有原理大致相同、操作更为简洁的试剂盒出现。现采用试剂盒法和国标法对相同样品、相同质控样同时进行测定，统计测定结果。对两种方法的灵敏度、准确度、精密度方面进行比较。1实验部分1.1 样品 井研县、金口河县、犍为县各140份尿样，包含儿童和孕妇。共420份。1.2 试剂 国标法：按照国标方法的要求进行配制。试剂盒：尿碘快速定量试剂盒AR型(武汉众生)。1.3 标准物质：冻干人尿中碘成分标准物质GBW(E)09108i、GBW(E)09109g GBW(E)09110n以及试剂盒中自带的质控样品。1.4 测定方法 国标法：取各尿样及标准使用液系列0.25
3、mL置于试管中，加入1.0mL过硫酸俊溶液(1.0mol/L )，置于100c烘箱中消化 60min,冷却后加入2.5mL亚神酸(0.10mol/L ), 混匀后放置15min,间隔30s加入0.3mL硫酸铀钱(0.076mol/L )反应，上分光光度计间隔 30s比色。试剂盒：取各尿样及标准使用液系列 0.20mL置于试管中，加入0.5mL消解夜， 置于100c烘箱中消化60min；冷却后加入0.5mL还原齐混匀。再加入0.5mL指示齐U摇匀。 加入0.5mL氧化剂的同时秒表计时，观察反应突变点。2结果2.1 标准曲线r值 分别使用试剂盒和国标法在不同温度下(温度都在15C-30 c之间，并
4、且同一标准曲线的温度波动不超过0.5 C)分别配制并测定了 6条标准曲线。表1国标法 线性相关系数r值测定次数线性方程相关系数r1C=-158.38 In A+36.48r=-0.99952C=-131.33 In A+70.98r=-0.99983C=-145.98 In A+60.37r=-0.99954C=-138.76 In A+66.30r=-0.99975C=-151.82 In A+70.92r=-0.99946C=-148.67 In A+87.95r=-0.9999表2试剂盒 线性相关系数r值测定次数相关系数r测定次数相关系数r1-0.99894-0.99952-0.9985
5、5-0.99903-0.99936-0.9993国标法的r值变异范围为-0.9994 -0.9999 ,平均相关系数为-0.9996.试剂盒的r值变异范围为-0.9985 -0.9995 ,平均相关系数为-0.9991 。试剂盒法的相关系数基本能达到0.9990 ,曲线较为稳定，能满足检测、分析的要求2.2 精密度和准确度试验每批平行测定3次，6条标准曲线则测6批冻干人尿中碘成分标准物质 GBW(E)09108i、GBW(E)09109g GBW(E)09110n 对应的浓度分别为70.8 科 g/L 9 科g/L、143 科 g/L 10 科 g/L、224 科 g/L 10 科 g/L。2
6、.2.1国标法精密度和准确度试验见表3 5。表3低浓度表4中浓度表5高浓度次数123；欠123次123166.769.068.511441451431224224223270.571.272.321421421412227223228374.173.272.831451481463224225227470.370.970.641461471444223220219567.468.968.651431481455222221218668.569.369.7614214114362252242242.2.2试剂盒精密度和准确度试验见96 8。表6低浓度表7中浓度表8高浓度次数123；欠123次12
7、3164.567.066.811381401431213220217269.370.470.621421451462216223219368.169.273.431521501443224230228470.771.472.941531451484222220223573.475.675.351361391425218216221667.569.973.661341411446224226227国标法:低浓度=70.1 ,相对偏差为0.99%,S=2.03 ,变异系数为2.90%。中浓度=144.0相对偏差为0.70%,S=2.24 ,变异系数为1.55%。高浓度=223.6相对偏差为0.45
8、%,S=2.72 ,变异系数为1.22%。试剂盒:低浓度=70.5 ,相对偏差为0.43%,S=3.10,变异系数为4.40%。中浓度=143.4相对偏差为0.28%,S=5.90 ,变异系数为4.12%。高浓度=220.0相对偏差为1.76%,S=4.84 ,变异系数为2.20%。试剂盒法测定的各浓度质控样浓度除高浓度一个点超出质控范围，其余17个点均在质控范围内，且相对偏差2.0%,变异系数5.0%,能满足日常检测要求。2.3检出限2.3.1 国标法：C=-148.67 In A+57.95,10 次测定的空白值分别为 1.476、1.454、1.484、1.452、 1.464、1.47
9、0、1.445、1.496、1.475、1.457.S=0.012 ,检出 限对应 的吸光度值为 1.481-3S=1.445，代入公式计算出检出限为 0.8ng ,最低检出浓度为 3.2 g/L o2.3.2试齐J盒：对空白样品进行10次测定，计算得 X=2098.46, S=309.61.代入公式计算出 检出PM为1.2 ng ,最低检出浓度为 6.0 pg/L。3尿碘检测结果比对每次抽取一个县140份样品在同一实验室同时分别采用国标法和试剂盒法测定。部分结果如下表9:表92种方法样品比对结果样号国标法试剂盒法%167635.9721211264.13372742.7841601653.1
10、251361276.6161321255.3071451514.1381441472.0891171180.85101841792.72116957021.01124934694.8713797011.39141541699.7415991034.04162582600.7817515813.72181571655.091987925.74202382577.98由上表9可见，用试剂盒法和国标法测定的样品结果基本一致，相对标准偏差基本小于10%在低浓度范围时误差相对较大。对420份样品的结果进彳T配对资料的t检验，d=5.09 ,t (140,0.05 ) =1.9826, t=1.86590
11、.05 ,表明两种方法之间的差异无显著性 意义。4.讨论根据实验操作过程和实验结果，说明尿碘的快速定量试剂盒检测是一个简单、方便、准确、稳定、重现性好的方法。该法虽然在精密度、准确度和灵敏度方面不优于国标法，但是 操作更为简便、快捷。该法与国标法的比较无显著性差异，具有同一性。该法测定的线性范 围为50科g/L 400科g/L ,高于国标的300科g/L ,当样品浓度过低时(50Wg/L )反应时间 过长降低了实验效率；当样品浓度高于400科g/L ,不适合使用标准曲线直接外推，可稀释后再测定。在针对大量样品和初筛检测时，该法比国标法更适合。使用试剂盒测定不需要 仪器，只需要一只能精确计时的秒表即可，同时不需要多人配合，最好一人观察实验的颜色变化。参考文献 1WS/T 107-2006 尿中碘的神铺催化分光光度测定方法 二 2尿碘定量检测试剂盒 AR型使用说明书武汉众生生化技术有限公司 3张兴全，郭三巧，李森.快速测定法与国标法分析尿液碘结果对比.中国地方病学杂志，2007,11 (20): 413 416
