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1、【嘉美实验】虽然液相蛋白定量检测的技术很多,但是大多数的技术仅能对样本进行单一指标的 检测，同时检测多个指标时则需要提供大量的样本分批检测，操作繁琐，且各指标间差异性较大。 对于样本量较少或需要对比各指标的用户，传统的技术无法满足需要。日常实验中，常需对溶液 体系中的可溶性蛋白进行定量检测，如细胞培养上清或血清中的细胞因子含量的定量分析，由于 这些因子的含量较少，低于一般常规方法的检测下限，使用常规的蛋白检测方法Wes tern Blo t 等很难检测。为此，著名的流式抗体公司BD-Pharmingen开发了基于流式细胞仪的液相蛋白定量 技术CBA。嘉美生物是该技术在国内最早的推广者，并同时为
2、广大生命科学研究者提供流式 CBA的检测外包服务。CBA工作原理：Cy tome trie Bead Array (CBA)，即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细 胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司 利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细 胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。CBA的基本原理近似于ELISA 的检测，即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗 粒一一待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。Seed Capture A
3、b Capture BeadAnalyte interestFlLroexcrrt drlclign Ab详细原理介绍：每个CBA微球大小一致，具有特定的荧光强度，包被有适用于特定分析(如其它 抗体或者可溶性蛋白)的特异性捕获抗体(Cap ture A nt ibody )，提供了类似ELISA孔板的捕获 表面。当微球和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品(血清、血浆或者细胞培养 液)中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物。 最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光， 在流式细胞仪的FL3通道通过检
4、测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性；检测抗体带有PE荧光 素标记，在流式细胞仪的FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。CBA技术特点：CBA是集ELISA和细胞流式技术优点为一身的液相蛋白检测技术。CBA的每一种 微球提供一种蛋白的捕获表面，捕获微球与待测样品后，呈悬浮态，与ELISA相比，能更有效地 捕获被分析物；CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、更准确。 下面我们介绍一下CBA主要的技术特点：1、轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。2、样本需要量小。仅需要50 “ L溶液就可进行一次检测。3、更高的灵敏度
5、。分析灵敏度高达2.8pg/mL。4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性OCBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml 级别，检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白 定量，排除了 ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。5、 检测对象的灵活组 一BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式 比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣，BD于2005年初推出了 CBA Flex set。它改 变了 CBAkit的固定形式，成为自由组合、灵活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的 捕获微球来检测多
6、个指标，最多能同时检测75个指标。除了拥有CBA kit的优势外，Flex Set 还配有独立的软件分析系统(CBA Flex Set Analysis Software)，并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer 上,直接用96孔和384孔板进行操作。CBA Flex set赋予研究者更灵活、更自由， 更大的选择空间，而且进一步丰富了 CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许 多领域的蛋白定量分析。6、操作简单，省时省力。CBA技术采用芯片式集成测定，所有检测只需一组标准曲线，就可计 算出每种待测蛋白浓度；操作简单，整个流程只需要3.5小时，对待测样本可做实时
7、分析，缩短 检测了时间，提高了检测效率。7、强大的软件分析系统。BD CBA软件具有强大的数据处理能力，直接将目标蛋白的检测结果换 算成标准浓度；除了为用户提供待测物的计数结果外，还能提供可视轮廓或信号图形以帮助用户 获得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋白定 量技术相比，CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。革新的CBA技术与传统的蛋白定量相比有下列优点:传统ELISA流式CBA检测技术单项检测多参数检测每项实验样本用量50-200ul样本用量少于50ul需要抗原包被操作方便，节省时间实验时间大于24h流式细胞仪自动检测，标准
8、曲线自动测定，专用软件自动计算酶-底物背景干扰无酶-底物背景干扰CBA应用：自CBA上市以来，越来越多的科研和临床研究人员将CBA应用于他们的领域。CBA应 用领域涉及眼泪、血清、唾液、细胞培养上清等样本中细胞因子、炎症因子的水平的分析。CBA 还用于细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白分析，系统性红斑狼疮（SLE）和新生儿脓血 症等免疫疾病的监控，肿瘤研究，药物对病人的治疗效果评估，药物研发，疫苗研究，总体免疫 功能分析等多领域。CBA指标检测明细:1、CBA指标目录号产品说明检测指标557800No n-human Primate Th1/Th2 Cytok ine KitIL-2, I
9、L-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-y560485Mouse Th1/Th2/Th17 Cytoki ne KitIL-2, IL-4, IL-6, IFN-y , TNF, IL-17A, IL-10551287Mouse Th1/Th2 Cytoki ne KitIL-2, IL-4, IL-5, IFN-y ,TNF552364Mouse In flammati on KitIL-6, IL-10, MCP-1, IFN-y , TNF, IL-12p70550026Mouse Immuno globulin Isotyp ing KitHeavy and light ch
10、a in isotypes of mouse IgG1,IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE560484Human Th1/Th2/Th17 KitIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-y , IL-17A550749Huma n Th1/Th2 Cytoki ne KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g551809Human Th1/Th2 Cytokine Kit IIIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g551811Huma n In flammato
11、ry Cytoki ne KitIL-8, IL-1B , IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70552990Huma n Chemok ine KitIL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10561418Huma n An aphylatox in KitC3A,C4A,C5A2、CBA Flex Set细胞因子检测指标HumanMouseRatIFN-y ,INF-asCD121a,sCD121bIFN- yIFN- yIL-1 a ,IL-1 P ,Soluble CD14IL-1 a ,IL-1P , IL-2,IL-3,IL-1 a , IL-4 ,
12、 IL-6,IL-2,IL-3,Basic FGFIL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,IL-10IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,VEGFIL-10, IL-12, IL-12p70,TNFIL-8, IL-9, IL-10,An gioge ninIL-13, IL-17A, IL-21,IL-11,IL-12, IL-12p70,G-CSF,GM-CSFIL-23p40,IL-13,IL-17A, IL-21,LIFTNFIL-23p40LT-aMIGTNF,TNFR I ,TNFRIIOSMMCP-1IP-10Gran zyme A,MIP-1 a , MIP-
13、1 PI-TACGran zyme BRANTESMIGFas Liga nd(FasL)KCMCP-1Fractalk ineCD62E(E-Select in),MIP-1 a , MIP-1 PIgA, IgG1, IgG2,CD62L(L-Select in)Eotax inIgG3,IgG4, IgM,G-CSF,GM-CSFRANTESTotal IgG,CD54(ICAM-1)CD62E,CD62P,CD62LCD106(VCAM-1)sCD40sCD1543、CBA Flex Set信号转导指标Phospho Akt1(S473)Phospho Akt2(S474)Phosph
14、o BLNK (Y84)Phospho p120 Cate nin(Y228)Phospho Btk (Y551)Phospho MEK1/2(S222)Phospho eNOS (S1177)Phospho Paxilli n(Y118)Phospho ERK1/2 (T202/Y204)Phospho Pyk2(Y402)Phospho Itk (Y511)Phospho SLP-76(Y145)Phospho JNK1/2 (T183/Y185)Phospho c-jun (S63)Phospho p38 (T180/Y182)Phospho stat3Phospho PLCg (Y78
15、3)Total Stat1Phospho Rsk(T573)Total SykPhospho Stat1 (Y701)Total ZAP70Phospho Syk (Y352)Phospho ZAP70 (Y319)4、CBA Flex Set干细胞指标Huma n Rex-1 Flex SetHuma n Nanog Flex SetHuma n Oct-4 Flex Set嘉美实验期待着在流式CBA的检测中与您合作。更多的实验、技术及产品的咨询，请联系嘉美 生物！嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体，重组人和动物蛋白，磷酸化抗体，各种动物ELISA试剂 盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。r.Q 、厶，、一 一iVi相关文章 芯片类检测：【uminex PIFXMAP RTOP【FX液相芯片检测实验服务 细胞生物学实验流式
