芦丁的提取分离和鉴别

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1、芦丁的提取分离和鉴别槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。味苦性凉，入肝、大肠经。具 有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒 炭应用。槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调 解其渗透性。临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。芦丁羟基化衍生物曲克芦 丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力 降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。一、实验目的：1掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法； 2

2、掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。二、仪器与试药（一）仪器SHB-III循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（250mL）ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱 移液管（10mL、5mL）（二）试药槐花米粗粉 硼砂 氧化钙 乙醇 盐酸 浓硫酸 硅胶 CMC-Na 镁粉a-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品 甲酸 丙酮三、主要成分的结构与性质：表51 槐花米中主要成分的物理性质中英名称分子式性状熔点（C）溶解性芦丁（芸香苷，rutin）C27H30O16淡黄色针晶174178C （含 3分子结晶水）， mp 188C （无水 物）难溶于冷水（0.0

3、013%）；可溶于热水（0.55%）、冷乙醇（0.36%）、冷甲醇 （1.0%）；溶于热乙醇（3.5%）、热甲醇 （11.2%）、吡啶（8.5%）、甲酰胺和碱 液。槲皮素(Guereetin)C15H10O7淡黄色针晶313314C （含 水物），316 C（无水物）可溶于冷乙醇（1:290），易溶于沸乙醇（1:23），可溶于冰醋酸、甲醇、丙酮、 乙酸乙酯和吡啶等，不溶于水、氯仿、 乙醚、苯、石油醚。白桦脂醇*(Betulin)无色针晶251252C能溶于醋酸、丙酮、醋酸乙酯、甲醇、 乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。槐花二醇*(Sophoradiol)无色针晶219220 C 或224 C

4、溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇；难溶于 水*皂苷（Saponin）,粗品为白色粉末，mp 210220C，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中,酸水解得上述两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。R=H槲皮素R= - glu - rha芦丁四、实验原理：1芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化， 又析出芦丁，利用此性质进行提取。并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶2芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。五、实验内容一）芦丁的提取分离和纯化槐花米粗粉（ 20g） 碱提取在500ml烧杯中加入水250ml，硼砂1g注1在加热至沸腾时，

5、投入槐花米， 继续直火煮沸23分钟，在搅拌下小心加入石灰乳，调至8.59注2保持 微沸30分钟，趁热用尼龙布挤过滤。滤渣滤渣加0.4%硼砂水溶液150mL,石灰乳调pH至8. 59,滤滤液酸沉淀在6070工下用浓盐酸调pH至4注3。静置6小时 以上析出沉淀。抽滤，用蒸馏水洗沉淀12次至中 性。滤渣煮15min,趁热过滤滤液（弃去）滤液沉淀（芦丁粗品）粗称重后按芦丁在热水中1 ： 200的溶解度加 蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中， 加热煮沸15分钟，趁热过滤。合并两次滤液，酸沉淀，在60-70C用浓盐酸调pH3-4注3,詁，用滤液水洗沉淀至中性充分静置，过滤，6070工干燥，称重。静置析

6、出沉淀（滤液（弃去）沉淀（芦丁粗芦丁）（精制品）粗称重后按芦丁在热水中1 ：200的溶解度加蒸馏水重结晶，加热煮沸使芦丁溶解，趁热过滤滤渣滤液冷却、静置、析晶，过滤 芦丁精品（60-70C干燥，称重）注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基的作用，使其不与Ca2络合，生成钙盐沉淀， 使提取收率下降。注 2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中的鞣质、粘液质和酸性 树脂（形成钙盐沉淀）等杂质，但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。注3： pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。（二）芦丁的水解芦丁精制品1%HSO （V/V） 80mL,水浴加热1小时，放冷后抽滤24

7、滤液沉淀（保留作糖份的鉴定）卄冷水洗涤至中性，抽干，干燥槲皮素粗品卄加95%乙醇重结晶槲皮素精品（三）鉴别实验 1芦丁的化学检识（1）盐酸-镁粉反应：取芦丁少许，乙醇溶解，加镁粉少量，加入浓盐酸ImL，产生红色反 应。（2）Molish反应：取芦丁和槲皮素少许，放入两支试管中，加入a-萘酚试剂少许，振摇，沿 试管壁加浓硫酸0.5mL，观察两层溶液界面的颜色变化。2糖的鉴别纸层析法取水解母液20mL，于水浴上加热，同时于搅拌下加BaCO细粉中和至中性，滤除BaS0后，滤34液在水浴上浓缩至2-3mL，得样品液，以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照。展开剂：正丁醇-醋酸-水（BAW） （4： 1： 5）上

8、层，上行展开。显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试液，喷后105C烘10分钟，显棕红色斑点。3芦丁和槲皮素的鉴定薄层层析法吸附剂：青岛硅胶G以0.4%CMC-Na水溶液制板，105C活化40分钟。展开剂：（1）芦丁：乙酸乙酯-甲酸-水（8:1:1）（2） 槲皮素：乙酸乙酯-丙酮-水（25:5:1）显色剂：喷三氯化铝试液显色，分别置254nm和365nm紫外灯下检视。六、实验结果1详细记录定性反应结果。 2绘制色谱图，并计算R值。f3总结实验过程中遇到的问题和解决方法。七、思考题1黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？2酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？3.本实验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与Rf值的关系。4黄酮类化合物定性反应机理。