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免疫荧光检测Keratin、vimentin、Ki67表达将P2/P5代处于对数生长期的PICs制备成单细胞悬液，调整细胞密度为1x105个/mL,以每孔1 mL 接种于6孔细胞培养板（内置直径为18 mm的圆型培养盖玻片），置入37C、5%CO2细胞培养箱中培养， 间隔3d换液1次。7d左右可观察到细胞均匀覆盖于盖玻片上，将载有细胞的盖玻片从孔板中取出， PBS液冲洗3次，4%多聚甲醛（含0.1 mol/L PBS）固定10 min，PBS液冲洗3次，0.5% Triton X-100处 理 30 min，PBS 液冲洗 3 次，分别滴加 Keratin 抗体（1 ： 50）、vimentin 抗体（1 ： 50）、Ki67 抗体（1 : 50），以PBS代替一抗作为阴性对照，一抗过夜，二抗，封片，激光共聚焦显微镜下观察细胞染色情况， 拍照。Ki67-阳性率越高，表示处于增殖期的细胞比例越高，阳性部位：核内。（CK）Keratin-肿瘤干细胞的标志物，阳性部位：胞浆，因上皮细胞表达角蛋白，间质细胞表达波形蛋白，分别以CK19和Vimentin为一抗， （PBS代替一抗作为空白对照），分别鉴定上皮细胞和间质细胞。（CK+,vimentin-）表示细胞不是间质来源的细胞，如上皮来源的肿瘤细胞。（CK-,vimentin+）表示细胞为间质来源的细胞，如成纤维细胞，
