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1、毕业论文（设计）题 目：对药品微生物限度检查法的思考类 别：毕业综合实训总结报告系 别：药学院专业班级：制药工程学 号：学生姓名：指导教师：时 间：目录学位论文作者声明 III摘 要IVAbstract IV1 前言 11. 1 研究目的及意义 11. 2 概况 12 研究现状 2 2 3 药品微生物限度检查法的解析 23. 1 药品微生物限度检查标准的修订 23. 2 不同药品微生物限度检测法 34 药品微生物限度检查方法的验证及改进建议 44. 1 药品微生物限度检查法验证 44. 2 药品微生物限度检查法中的问题及其改进建议 54.2.1 实验室环境的影响 54.2.2 培养基的影响 5
2、4.2.3 灭菌方法 54.2.4 实验人员的影响 65 前景与展望 6参考文献 6致谢 8学位论文作者声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独 立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内 容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果 作品。本人完全了解有关保障、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向有关学位论文管理机构送交论文的复印件和电子版。同意 省级优秀学位论文评选机构将本学位论文通过影印、缩印、扫描 等方式进行保存、摘编或汇编；同意本论文被编入有关数据库进 行检索和查阅。本学位论文内容不涉及国家机密。论文题目：药品微生物限度检查法的思考作者单位
3、：作者签名：年月日药品微生物限度检查法的思考摘要药品微生物限度检查法在我国已经有较高的检验水平，然而微生物限度检查在实际工作中却存 在一些问题，对临床用药造成了一定的影响。对我国药品微生物限度检查法及现状发展进行了阐述, 并对我国药品微生物限度检查中存在的问题进行了分析和探讨，提出了一些改进的措施。关键词药品；微生物限度检查法；现状；思考Talk about microbiological limits on drugsAbstractPharmaceutical microbial limit test in our country already has a higher level of
4、 inspection, and microbial limit inspection in practice, however, there are some problems, had a certain influence on clinical drug use.Pharmaceutical microbial limit test and the present situation and development of our country in this paper, and the problems existing in Chinese pharmaceutical micr
5、obial limit inspection are analyzed and discussed, some improvement measures are put forward.Key wordsDrugs; microbial limit test; status quo; thinking1 前言微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法 1。药品与我们的生活息息相关，药品的安全性、质量将直接影响到消费者的健康和安 全，为消费者提供安全、卫生、无污染的药物是每个药学人员需要学习和实践的。生产、 加工、储存、运输、销售药品的过程中，药品都将受到各种因素污
6、染的影响。随着中国 药典中微生物检测的比重越来越大，医药企业纷纷开始重视微生物的检测。1. 1 研究目的及意义药品用于治病救人，但在没有检测的条件下，可能含有各类致病、致死的微生物或 元素。比如药品中会含有，被患者吸入肺部，导致肺部感染的霉菌；含有使人患上败血 症的金黄色葡萄球菌；导致肠道疾病的大肠杆菌等。意识到微生物污染存在的危险，药 学人员开始关注药品内微生物含量的检测，为药品安全提供更有力的保障。微生物由于 重量轻、体积小、繁殖能力强、适应性强等特点。广泛分布于自然界中。药物也不 例外，一些药能产生抗菌性来抑制细菌、真菌的生长，但并不是每一个药物，都能避免 药物含有细菌、真菌等微生物，有
7、的微生物产生对人体有益的物质，但大多数药物的微 生物会产生污染，不仅影响药物本身的质量、效果，严重的将威胁到人类的生命安全与 健康。因此有必要测试药物的微生物含量，使药物可以在微生物含量安全的范围内进行 使用。1. 2 概况1972年我国开始接触药品微生物限度，1995年药典开始收录药品微生物限度，但 标准尚未被载入。在接下来的2000年、2005年，中国药典增加了以剂型载入的微 生物限度，以及微生物限度检查时的所有方法的验证。其操作方法包括有以下几项：平皿法（直接法）：首先，在每个灭菌平皿中注入1ml原液，注意每个稀释级注中 需要有23个平皿，所有的平板都需要慢慢注入1ml供试液，为了防止倒
8、吸，管内需没 有残留液体。大约15ml注入45C培养基中，顺时针或逆时针旋转平板混匀。阴性对照实验：取1ml实验所需稀释液，放在无菌培养皿中，注入培养基后，需倒 置培养，测试结果应该是阴性的，不含有细菌。霉菌、酵母菌计数平板倒置在 2325C 霉菌培养箱培养。培养结束后在培养基背面直接用肉眼观察计数。薄膜过滤法：实验前，所有实验室设备需消毒，水溶性供试品，应先进行滤膜润湿 冲洗，而油类供试品滤膜、滤器需保持干燥。实验过程，首先对lml或1g样品的供试 液进行过滤，然后用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每个培养基必须至少有一 个滤膜，冲洗后取出滤膜，细菌面朝平板表面贴于平板上，不允许
9、有气泡或缝隙。对于 其中每一个供试品，都需要有一组阴性对照，即取试验用稀释剂lml,操作与样品操作 相同，阴性均不得长菌。大肠埃希菌检查：近年来，抗菌药物已广泛应用4。大肠杆菌已成为医院感染的主 要致病性细菌5。大肠杆菌对多种抗菌药物具有耐药性，给临床治疗带来许多限制和竞 争。其检查的具体操作如下流程图所示：配置培养基及稀释液一供试液的制备一增菌培养（胆盐乳糖）一靛基质试验、荧光 检查f检查结果判断f （双阴性或双阳性f蓝白荧光、玫瑰红色液面；阴性、阳性 一分离提纯一麦康凯琼脂、EMB琼脂平板一观察菌落特征）一书面检查记录单2 研究现状根据我实习的经历我发现，一些医药公司对药品微生物限度检查意
10、识淡薄 ,他们在 检验药品的含量、溶出度时把关较严,但在药品微生物限度检查上却没有严格操作的意 识,一般会将送验的药品进行无菌处理 ,但在抽检的品种中就会出现药品微生物限度不 合格的现象。我在实习的过程中发现，操作人员在实际操作中并不严谨，药典中药品微 生物限度检查的相关规定与实际操作存在脱节的现象，其原因在于现存的规定比较笼 统，并未对每种药品进行详细的要求，再加上操作人员的理解误差，从而导致实验结果 的误差。 2005 年新增了药品微生物限度检查方法的验证，然而许多医药企业对此部分的 资料较为凌乱，遗漏较多。有的实验设计不够严谨，有的不够规范，不能反映试验方法 的完整性与可行性。药品微生物
11、限度检查验证工作比较笼统和复杂，但在药品微生物限 度检查工作中是至关重要的一部分，不容忽视。3 药品微生物限度检查法的解析3. l 药品微生物限度检查标准的修订随着药典的不断完善，我国药品微生物限度检查法越来越成熟，在 l995 年以前刚 刚开展的药品微生物限度检查，再到 l995 年，药典正式开始记载药品微生物限度检测 方法，再到 2000 年药典对大部分化学药制剂、中药制剂的微生物限度的收载，使药品 微生物限度开始进入正轨。 2005 年，药典利用用药途径进一步提高了药品微生物限度的 标准，增加了方法验证的内容，使微生物检测更加 科学。3. 2 不同药品微生物限度检测法盐酸克林霉素微生物限
12、度检查：首先是供试品溶液的配置：精确称取10g盐酸克 林霉素样品，于稀释液（pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液）中溶解，并稀释至100ml，充 分振摇均匀，即为供试品溶液。配置好供试品便可以进行微生物限度检查了，其具体检查项目及操作如下：需氧菌总数：在无菌滤器中，用移液管吸取10ml供试品，缓慢加入，同时用过滤 器进行过滤，再用100ml的无菌pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，进行淋洗滤膜，需冲洗八 次，冲洗完毕取出滤膜，菌面朝上贴于在事先准备好的无菌TSA平板表面，用于需氧菌 计数。在隔水式培养箱中倒置TSA培养基，在30C35C中培养35天，培养结束后进 行计数，需平行检测。霉菌及酵母菌：在无菌滤
13、器中，加入10ml用移液管吸取的供试品，进行抽滤，同 样需要用100mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，进行充分淋洗8次，取出滤膜，菌面朝上 贴于事先制备好的SDA平板表面，用于霉菌和酵母菌计数。霉菌培养箱中倒置SDA培养 基，在20C25C中培养57天，培养结束后进行计数，需平行检测。大肠埃希菌：培养结束后，震摇容器，在100ml麦康凯肉汤培养基中，加入1mlTSB 培养液，在4244C中培养2448小时。然后在麦康凯琼脂培养基平板上进行划线6。 划线完倒置在3035C下培养1872小时。观察菌落外观。说明：若平板生长出红色，非粘液型菌落，则表示样品中存在大肠埃希菌，需用合 适的生物化学鉴定试
14、验加以确认。如果生物化学鉴定试验结果呈阴性或平板中未见此类 菌落生长，则表明产品符合规定。甲砜霉素微生物限度检查：供试品制备：在无菌的100ml的pH7.0氯化钠-蛋白胨 缓冲液中，加入精密秤取的甲砜霉素10g，振摇使药品混合均匀，将上述溶液置于离心 管中，于500r/min离心3min；取离心后的上清液，做1:10的供试液。供试液制备完成，便可以开始精心微生物限度检测，具体操作如下：细菌霉菌及酵母菌计数：采用薄膜过滤法过滤上述供试液10ml，再用100ml无菌 的 PH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液进行冲洗，需冲洗三次，冲洗完毕取滤膜，菌面朝上， 贴于玫瑰红钠琼脂培养基平板或营养琼脂培养基平板
15、上，分别作平行试验。倒置营养琼 脂培养基于生化培养箱中进行培养。30C35C培养三天10。倒置培养玫瑰红钠琼脂 培养基于霉菌培养箱，2325 C培养五天。大肠埃希菌：过滤供试液10ml，再取无菌的PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液进行冲洗 11。冲洗完取滤膜，放置于100ml胆盐乳糖培养液中，在3035C中培养1824小时， 之后操作与盐酸克林霉素一致。瑞格列奈微生物限度检查：首先进行供试液制备，用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，稀释精确秤取瑞格列奈（REP）样品10g至100ml，振摇使其分散均匀，然后 静置 5-10分钟，取中间清层为供试液。限度检查操作如下：需氧菌、霉菌及酵母菌总数的计数：取温度不超过45C的溶化的TSA和SDA培养 基15ml左右，注入1ml供试液，混匀、凝固后需倒置培养。SDA倒置于2025C培养 七天，TSA需倒置于3035C培养五天，并逐日计数，需做空白对照。大肠埃希菌的检查：同盐酸克林霉素。联苯双酯微生物限度检查：供试液的制备：取 100ml 无菌的 PH7.0 氯化钠-蛋白胨 缓冲液，稀释精确秤取的联苯双酯10g，振摇使其均匀，静置后取其上清液，作为1:10 的供试液。供试液制备完成后操作如下：需氧菌、霉菌及酵母菌的计数：用薄膜过滤法过
