多重耐药菌ESBLS的概念及检验方法

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1、esblsESBLs 是英文Extended Spectrum Beta-Lactamases的缩写, 中文翻译为超广谱缶内酰胺酶。大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍 曼不动杆菌等通常最易生产,其次,阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、 弗劳地枸橼酸菌、绿脓杆菌也可生产。其特点是可以水解灭活青霉 素类抗生素、头孢菌素(主要为第三代头孢菌素,如头孢他啶、头孢 哌酮等,马斯平等除外)和单环。-内酰胺类抗生素(氨曲南、卡芦莫 南等),通常不水解头霉素类(头孢西丁、头孢美唑等)和碳青霉烯类 (亚胺培南、美罗培南等)。其活性可以被克拉维酸、舒巴坦、他唑 巴坦等。-内酰胺酶抑制剂所抑制。我国的产ESBLs菌株主要是分 解

2、头孢噻肟的CTX-M型。耐药特点如果临床出现产ESBLs菌株,那么对青霉素类、第三代头孢菌 素(头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、头孢曲松等)、单环。-内酰胺 类抗生素(氨曲南)耐药,ESBLs在实验室有一专门的检测方法,如 果病人的药敏报告单已注明为产ESBLs菌株,那么说明已经实验室 确证。如果病人药敏报告单未注明为产ESBLs菌株,三代头孢菌素和单环酰胺类抗生素中有一种MIC2ug/ml,或符合CAZ22mm.ATM27mm、CTX27mm、CRO2mg/L时,即可筛选出可疑的ESBLs菌株,符合 NCCLS(1999)推荐的筛选药物组合及浓度范围,可用于ESBLs的筛 选。2. 用浓度梯度

3、法(Etest法)的常规试条中的三代头孢菌素或氨曲 南(2种以上),凡MIC2mg/L时,即高度疑心为ESBLs,应进一步作确 认试验来加以确诊。现有2种Etest法的ESBLs确认试条,分别是头 孢噻肟及头孢噻肟加克拉维酸、头孢他啶及头孢他啶加克拉维酸。 检测结果加克拉维酸和不加克拉维酸的MIC差值8倍(3个稀释度), 可确认为ESBLs菌株。Etest检测ESBLs的具体操作步骤是(1)在常规试验中选出对三代头孢MIC1mg/L的菌株(比NCCLS 的标准低一个稀释度);(2)按NCCLS(1999)推荐的方法,用2种底物筛选和确认 ESBLs(筛选试验:在头孢噻肟或头孢曲松中选1种,头孢

4、他啶或氨曲 南中选1种。一确认试验:用头孢噻肟和头孢他啶);(3)确认该菌对头孢西丁的MIC8mg/L,以排除质粒AmpC酶;(4)再测定该菌对其他非P内酰胺抗生素的药敏模式,以指导抗菌 治疗或收集流行病学资料。折叠推荐方法1. 双纸片扩散法:药敏平板和菌液的制备方法与常规药物敏感试 验相同,将菌液涂布在,MH琼脂平板上,贴上药敏纸片,1张为三代头 孢菌素(头孢他啶、头孢噻肟或头孢曲松)或氨曲南,1张为含有P内 酰胺酶抑制剂(克拉维酸10mg/L)的纸片,两纸片相距2030mm(中心 -中心),35C孵育1824小时,观察结果。如显示协同为阳性。2. 三相扩散法:该法又有直授法和间接法2种。直

5、接三相扩散法 是在纸片扩散法的根底上略加改动,首先按标准纸片扩散法进行操作, 贴上药敏纸片,在离纸片3mm处打一个小孔(靠近平板中央一侧),内 加200pl浓度为105106的菌液,35C孵育过夜,如在头孢他啶、头 孢噻肟、头孢曲松或氨曲南周围的抑菌圈形状发生改变,试验为厂 性。如果在上述抗生素周围的抑菌圈很小或没有抑菌环,应该用间接 法重复。间接三相扩散法与直接法不同在于,直接法平板外表涂布的 细菌和小孔内的细菌是相同菌,而间接法平板外表涂布的细菌是用对 上述药物均敏感的菌株如大肠埃希菌ATCC25922,小孔内为试 验菌。如出现试验菌孔干扰敏感菌株形成抑菌环的现象即判断为阳 性。该试验的优点在于可以同时亍解细菌对抗生素的敏感情况和产 ESBLs的情况,但需要有经验的人员来判断结果。此外,尚可用生物化学技术检测ESBLs的等电点(等电聚焦电泳), 或分析酶的底物谱及抑制物谱来分型。也可用分子生物学技术检测 和分析编码ESBLs的基因或突变位点,如聚合酶链反响(PCR)- SSCP、PCR-限制性内切酶试验、PCR-点杂交、DNA探针或序列 分析等。

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