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1、培养基配方1斜面菌种保存培养基培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸，纱布过滤，滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121C灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的34倍加水,搅拌均匀后，37c左右浸泡1小时，然后缓缓加温至5563c（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温46小时（用摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖
2、化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加力琼脂，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121C灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。2基菌落总数检测平板计数琼脂培养基将？胰蛋白月东5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸储水1000ml中，煮沸溶解后，调pH,然后在121c下灭菌15min,取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。3志贺氏菌检测GN增菌液成分：胰蛋白月东：20g,葡萄糖：1g,甘露醇：2g,柠檬酸钠：5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸储水1000ml。制法：将上述物品加入蒸储
3、水中，加热溶解煮沸，调pH为，分装，在115c高压灭菌15min。HE琼脂成分：月东：12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂1820g,蒸储水1000m10,%M麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。制法：将上述前七种成分加入400ml蒸储水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸储水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH,再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至5055C,倾注浇平板。注1:此培养基不能图温火菌。注2:甲液的配置：硫代硫酸钠：34g,柠檬酸铁钠：4g,蒸储水：100ml。注3:乙液的配
4、置：去氧胆酸钠：10g,蒸储水：100ml。注4：Andrade指示齐ij的配置：酸性复红：0.5g,1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml,蒸储水：100ml。将酸性复红溶解于蒸储水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液12ml。SS琼脂3.3.1 基础培养基：成分：牛肉膏：5g,月东：5g,三号胆盐：3.5g,琼脂：17g,蒸储水：1000ml。制法：将牛肉膏蛋白月东，三号胆盐加入到400ml蒸储水中，将琼脂加入到600ml蒸储水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121c下灭菌15min,保存备用。3.3.2 完全培养基成分：基础培养基：1000ml,乳糖：10g,柠檬
5、酸钠：8.5g,硫代硫酸钠：8.5g,10%宇檬酸铁溶液：10ml,1%M生红溶液：，%煌绿溶液：。制法：加热融化基础培养基，按比例加入处染料以外的所有成分，搅拌均匀，调，加入中性红溶液和煌绿溶液，混合均匀后浇平板。注1:配制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱48h内使用。注2:煌绿溶液配好后，应在10日内使用。注3:可以购买SS琼脂的干燥培养基。麦康凯琼脂成分：蛋白月东：17g,月东：3g,猪胆盐（牛、羊胆盐）：5g,氯化钠：5g,琼脂：17g,蒸储水：1000ml,乳糖：10g,%吉晶紫水溶液：10ml,%中性红水溶液：5ml。制法：将蛋白月东、月东、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸储水中
6、，调，将琼脂加入到600ml蒸储水中加热溶解，将两液混合均匀，于121c下灭菌15min备用。临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖，等冷却到5055c时，加入结晶紫和中性红水溶液，搅拌均匀后浇平板。注：结晶紫和中性红水溶液配好后，须经高压灭菌。伊红美蓝琼脂（EMB成分：蛋白月东：10g,乳糖：10g,磷酸氢二钾：2g,琼脂17g,2%尹红Y溶液：20ml,噱蓝溶液：10ml,蒸储水1000ml,。制法：将蛋白月东、磷酸盐、琼脂溶解于蒸储水中，调pH,于121c下灭菌15min备用。临用时加热融化琼脂，并加入乳糖，冷却至5055c时加入伊红和美蓝溶液，混合均匀后浇平板。三精铁琼脂成分：蛋白月东：20
7、g,牛肉膏：5g,乳糖：10g,蔗糖：10g,葡萄糖：1g,氯化钠：5g,六水硫酸亚铁镂：0.2g,硫代硫酸钠：0.2g,琼脂:12g,酚红：0.025g,蒸储水：1000ml,。制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸储水中，调pH,然后加入琼脂，加热溶解，加入姗红水溶液，摇匀，分装时量多一点，于121c下灭菌15min,搁高层斜面备用。葡萄糖半固体发酵管成分：蛋白月东：1g,牛肉膏：0.3g,氯化钠：0.5g,%（甲酚紫酒精溶液：，葡萄糖：1g,琼脂：0.3g,蒸储水：100ml,。制法：将蛋白月东，牛肉膏，氯化钠加入水中，调pH后，加入琼脂，煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于12
8、1c下灭菌15min,备用。半固体管成分：蛋白月东：1g,牛肉膏：0.3g,氯化钠：0.5g,琼脂：0.4g,蒸储水：100ml,。制法：将上述成分溶于水中，加热煮沸，并调pH后分装小试管，121C高压灭菌15min,直立凝固备用。尿素琼脂成分：蛋白月东：1g,氯化钠：5g,葡萄糖1g,磷酸二氢钾：2g,%红溶液：3ml,琼脂：20g,蒸储水：1000ml,20流素：100ml,士。制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调pH,加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶，121c高压灭菌15min,冷却至5055c后，加入经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为2%最终的pH应为士。分装于灭菌试管内，搁斜面备
9、用。西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分：氯化钠：5g,七水硫酸镁：0.2g,磷酸二氢镂：1g,磷酸氢二甲：1g,柠檬酸钠：5g,琼脂：20g,蒸储水：1000ml,婕麝香草酚蓝溶液：40ml,。制法：先将盐类溶解于水中，调pH,再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121c下灭菌15min,搁成斜面。实验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36c1C培养4天，每天观察结果，阳性者斜面上有菌落生长。培养基由绿色转为蓝色。富化钾（KCN培养基成分：蛋白月东：10g,氯化钠：5g,磷酸二氢钾：0.225g,磷酸氢二钠：5.64g,蒸储水：1000ml,海化钾7容液:20ml,。制法：将除富化钾以外
10、的成分配好分装，121c灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却，每100ml培养基加入淘化钾溶液（最后浓度为1:10000）,分装于12m诉100mnM菌试管，每管约4ml,立刻用橡皮塞塞紧，放在4c冰箱内，至少可保存两个月，同时将不加富化钾的培养基作为对照培养基，分装备用。试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白月东水内成作为稀释菌液，挑取1环接种于富化钾培养基，另外挑取1环接种于对照培养基，在36C1C下培养12天，观察结果，如有细菌生长，则为阳性，经2天后不生长则为阴性。注：富化钾是剧毒物质，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行，实验失败的主要原因是封口不严，富化钾逐渐
11、分解，变成氢富酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，造成假阳性现象。氨基酸脱竣酶实验培养基成分：蛋白月东：5g,酵母浸膏：3g,葡萄糖：1g,蒸储水：1000ml,%澳甲酚紫乙醇溶液：1ml,L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml,。制法：除氨基酸以外的所有成分加热溶解后，分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按制口入，DL-氨基酸按1啕口入。再调，对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管，上面滴加一层液体石蜡。115c高压灭菌10min。实验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36c土1C下培养1824h,观察结果，氨基酸脱竣酶阳性
12、者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者因为碱性物质产生，但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色，对照管应为黄色。蛋白月东水（靛基质试验用）成分：蛋白月东或胰蛋白月东：20g,氯化钠：5g,蒸储水：1000ml,制法：将上述成飞混合均匀，分装小管，121c灭菌15min。靛基质试剂：柯凡克试剂：将5g对二氨基甲醛溶于75ml戊醇中，然后慢慢加入浓盐酸25ml。欧-波试剂：将1g对二氨基苯甲醛溶于90m195%勺乙醇内，然后慢慢加入浓盐酸20ml。实验方法：挑取少量接种物接种，在361C下培养12天，必要时可培养45天，加入柯凡克试剂约，轻摇试管，阳性者试剂层呈深红色，或加入欧-波试剂，沿管壁流下，覆盖于培
13、养液表面，阳性者接触面上呈玫瑰红色。注：蛋白月东应含有丰富的色氨酸，每批蛋白月东买来后应用已知菌种实验。糖发酵管成分：牛肉膏：5g,蛋白月东：10g,氯化钠：3g,十二水磷酸氢二钠：2g,腿麝香草酚蓝溶液：12ml,蒸储水：1000ml,。葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按制口入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121c灭菌15min。其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100m1,121C灭菌15min,另将各种糖类配好10%液，一同灭菌，将5ml糖溶液加入到100ml液体培养基中，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36c1C,一般观察23天，迟缓反应需观察1430天。5%乳糖发酵管成分：蛋白月东：0.2g,氯化钠：0.5g,乳糖：5g,2艰麝香草酚蓝水溶液：，蒸储水：100ml,。制法：除乳糖以外的各成分溶解于50ml蒸储水内，调pH,将乳糖溶解于另外50ml蒸储水中，分别于121c灭菌15min,将两者混合，以无菌操作分装到小试管中。注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵
