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1、部分发酵产品生产工艺及培养基配方我国1958年才开始赤霉素的研究、生产和推广应用，并于1969年因为党的“九大召开及国庆20周年，故把赤霉素称之为 九二O”2 5n m发酵罐工业化生产试验21 试验材料与方法 211 菌种：G-l14212 试验地点：湖南生物制药厂213 培养基 种子培养基(ww)：葡萄糖15,糊精10，花生粉15,MgSO47HzO 01,KH2PO4 01，消泡剂02,自来水配制，自然pH值,6m3种子罐中投料3m3 ，实罐消毒121 ，30分钟，冷却至28待接种。 发酵培养基(ww)：玉米淀粉70,饴糖25；豆饼粉03，花生粉10,MgSO47H2O 007，KH2PO
2、4 014；消沫剂005， a一淀粉酶0。05,50m3发酵罐投料40m3。pH值自然,实罐消毒121C，30分钟，冷却至28后接入种子培养液2,14 发酵设备；种子罐6 m3，二档搅拌 发酵罐体积50m3。，三档搅拌 流加罐用另一种子罐代替215 发酵条件种子罐：培养温度28 士I ,通风量l：I vv,罐压04-05 kgcm2发酵罐：培养温度28士l ，通风量l：07 vv,罐压01015 kgcm2赤霉素发酵参考环境:1060吨罐，搅拌转速115转/分，通风量1：1/分， 培养温度大多采用2932 .培养基的起始pH值控制在5.5左右，而将发酵过程的pH值维持在3。54。5之间为宜。种
3、子培养基：葡萄糖0.3g，蒸馏水lOOml.豆饼粉 1.5g，淀粉1。Og,葡萄糖1.Og,KH2PO4 0.lg，(NH4）2SO4 005g，MgSO4 0。1g，自来水lOOml。发酵培养基：豆饼粉0。9淀粉7.0，葡萄糖1。0,KH2PO4 0.15%,MgSO40。08，a-淀粉酶0。003，pH 55.5发酵周期130小时阿维菌素：种子培养基( g/L):淀粉30，豆饼粉20,酵母粉2。0,CoCl26H20 0。0005，pH 7072.发酵培养基(gL)：淀粉50，玉米粉l0，酵母粉l0，豆饼粉10CaCO3 2。0，CoCl26HaO00005，pH 7。0 7.2。妥布霉素
4、发酵培养基：黄豆饼粉2.5；葡萄糖1。O； 玉米粉1。O; 玉米淀粉1.5；(NH4)2SO4 0。5；鱼粉O.4;MgS04 0.6; 油1.0;ZnSO4 0。05；CaCO3 0.6；温度37,发酵时间112h左右.发酵菌种采用黑暗链霉菌.洛伐他汀培养基：淀粉,黄豆饼粉，葡萄糖，玉米浆,K2HPO4,(NH4）2S04,CaCO3，发酵菌种采用红曲菌株,M。ruber。发酵周期10天。甾体激素氢化可的松菌种:蓝色犁头霉(As365），培养基（) 葡萄糖1.O，酵母膏0。23，玉米浆1.5，硫酸铵0.5；pH值6.46.5；m1)，28 培养24h，投入0。25的RSA（发酵底物醋酯化合物
5、:17a一羟基孕甾一4一烯一3，2O一二酮一21一醋酸酯,RSA），然后转化3642h。综上所述，在利用整肠生菌(Bacillus Licheniformis）等杆菌发酵生产杆菌肽中，由于前期微生物生长繁殖迅速，碳源消耗量较大。在发酵中后期的碳源主要用于杆菌肽次级代谢产物的合成，故碳耗较平稳.所以碳源不宜过多，23为宜。同时杆菌肽生产与其它抗菌素生长碳源不同，实验表明，加入3柠檬酸作为碳源最佳，以保证菌体迅速生长。如果中后期碳浓度过高，会引起菌体生长太快，而减少杆菌肽合成。所以，对碳源种类的选择和控制至关重要，在选择适合种类碳源的条件下，碳源量的控制方法可采用碳比消耗速率、菌体比生长速率和控制
6、流加碳源速度.同时,由于过量磷酸盐对杆菌肽前体氨基酸形成有抑制作用，从而干扰杆菌肽的合成.所以，无机磷酸浓度应控制在0110 mmolL，以便既能满足菌体生长需要又不影响杆菌肽的合成。此外用整肠生菌发酵生产杆菌肽,发酵pH为75，发酵时间为40 h为宜。杆菌肽是利用整肠生菌发酵pH为75,发酵时间为40 h杆菌肽发酵参考环境:5100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0.7公斤, pH 7。5左右，培养基主要成分为液化淀粉，豆粕，柠檬酸,各种无机盐适量，发酵菌种采用整肠生菌,发酵周期40小时。井岗霉素属氨基环醇类抗生素，是一种抗水稻纹枯病的农用抗生素，具有药效高，无毒副作用，持
7、效时间长的特点,是一种重要的农用抗生素。井岗霉素产生菌是在我国井岗山地区土壤中分离出的吸水链霉菌的一个变种,定名为吸水链霉菌井岗变种(Steptomyces Hygroscopicus Var Jinggangensis），属好氧放线菌。井岗霉素的工业生产过程如下:筛选后的菌种经固体增殖培养后，接入种子罐，在40C下,通气培养20 h后，移入发酵罐，在40C通气量0508 vvm条件下，发酵40 h放罐，将发酵液过滤后，浓缩至所需浓度，成品包装。井岗霉素1976年通过鉴定并开始工业生产，但由于种种原因对其发酵过程并未进行系统地研究。同时，发酵工艺也维持在传统的间歇发酵方法，因而井岗霉素发酵的水
8、平(俗称效价)一直徘徊在一万单位（ug/mL）左右,仅为实验室发酵水平的70%。宁南霉素水稻自叶帖病是水稻生产上的三大病害之一化学农药虽然有控制该病的作用，但造成环境和农产品污染,直接影响人、畜健康，宁南霉素为首次发现的胞嘧啶核苷肽型新抗生素它是一种高效，低毒，低残留的广谱性农用抗生索。它对水稻白叶枯病平均相对防治效果为70左右高的可达90，一般增产效果为 l0-20，高的可达35另外它对小麦蔬菜，花卉等白粉病的防病，增产效果都很显著,对水稻小球菌棱病和油橄榄孔雀斑瘸、疮痂病也有良好的防治效果。宁南霉:玉米粉2 淀粉1%花生饼粉3,酵母粉0.05,无机盐按原用量NaCl 0.5%，CaCO3
9、0。5 ，MgSO4 0。0025，(NH4)2SO4 0.25%，K2HPO4 0。02不变。11l 菌种: 诺尔斯链霉菌西昌变种。112 培养基:孢子斜面培养基(%):可溶性淀粉2 蔗糖1，硝酸钾1，磷酸氢二钾05，硫酸镁05，氯化钠05，碳酸钙05，硫酸亚铁001，琼脂2，灭菌前pH7 274。种子培养基(): 玉米粉2，黄豆饼粉3，酵母粉001，磷酸氢二钾001，硫酸镁O0025，氯化钠002，碳酸钙003，灭菌前pH70。发酵培养基（)： 玉米粉2，花生饼粉35，酵母粉005,磷酸氢二钾002,硫酸镁005，氯化钠03，碳酸钙05，灭菌前pH70.113 发酵流程： 续发酵48h达到
10、发酵高峰。阿维菌素:多抗霉素参考发酵培养基（）；玉米粉:1.5，豆饼粉:2。0,饴糖：2。0，KH2P04:O。1，NaCl：0.1，CaC03：O.3，pH6。5。10接种量，28,120h。BT: 一系列发酵罐间歇发酵结果表明：该茵生长的最适pH在7072,弱碱性条件有利于芽泡及晶体的形成；增加培养基中糖含量显著提高茵体的生长量，但对芽泡及晶体的形成均有一定影响；高通气量有利于菌的生长，并可缩短发酵周期，但后期通气量过大影响芽泡及晶体形成。该菌制刑发酵罐间歇发酵的最佳工艺条件为：控制发酵温度在30，发酵前期(包括延迟期、加速期、对数期）pH控制在70，采用达1:20V(Vmin)的大通气量
11、,达1：20V (Vmin）,为菌的生长提供良好的环境，尽可能提高菌数(高于75x10的10次方ml)；发酵后期(减速期、恒定期）不控制PH，并适当减小通气旦到1：05,1：10V(Vmin），更有利于茵体向芽孢及伴孢晶体转化(98以上）.液体培养基(） I号培养基：牛肉膏05,蛋白胨15，NaCl 05，pH 72， H号培养基：牛肉膏05，蛋白胨15,NaCl 05,葡萄糖10,PH7.2衣康酸发酵参考环境：5100吨罐，搅拌转速100转/分,通风量1:0。2/分，罐压0。7公斤， pH在4左右，培养基主要成分为葡萄糖14，米糠0.3%，各种无机盐适量，发酵菌种采用土曲霉，发酵周期90小时
12、。 曲酸发酵参考环境:5100吨罐，搅拌转速100转/分,通风量1：0。2/分，罐压0.7公斤， pH在4左右，培养基主要成分为液化淀粉14，各种无机盐适量,发酵菌种采用黄曲霉，发酵周期130小时。实验以豆腐渣、黄浆水为主要原料利用米曲霉发酵生产曲酸，对发酵生成曲酸所需添加的各种营养因素和发酵条件进行了研究。得出该菌利用豆渣的最佳发酵培养基为：豆渣80、麸皮24、酵母膏12、MgSO47H2O 016,pH为自然；接种量为10，每250mL三角瓶装量为50g，在30发酵培养，56d菌体生长量和曲酸产量最大。米曲霉利用黄浆水生产曲酸的最佳发酵培养基为：葡萄糖12%、酵母膏05、MgSO47H2O
13、 005、K2HPO4 005、黄浆水100，pH为60，接种量10。每250mL三角瓶装量100mL在30转速为200rmin的摇床振荡发酵培养， 56d菌体生长量和曲酸产量最大。对米曲霉沪酿3042曲酸发酵工艺条件进行了研究，分析了碳源、氮源、pH、装液量对曲酸产酸量的影响，获得了最优摇瓶培养条件:10蔗糖、1蛋白胨、pH=25、装液量40mL（250mL三角瓶），发酵温度30、摇瓶转速200r/min条件下达最高产酸量3340mgL1。从土壤中分离出一株曲酸产量较高的米曲霉（Aspergillus oryzan）菌株,对该菌株的发酵条件进行了初步研究。结果表明，该菌株在淀粉8、酵母膏02
14、%、MgSO47H2O 005、K2HPO4 0.1、pH60的培养基中，28恒温摇床据荡培养6d，摇瓶发酵液曲酸含量为412mg/mL。 F31012 变株是以Aspergillus oryzae(米曲霉)2336经3次紫外诱变处理，采用快速筛选方法而获得的突变株，研究了F31012变株发酵工艺条件，经过正交试验得出该突变株最佳发酵培养基为：玉米淀粉10，酵母膏02，K2HPO40.15，MgSO4.7H2O0.05，KCl0。05%,pH6.0。移种量为 15%，每300ml三角瓶装量75ml，时间6天,发酵培养基最适温度为30.柠檬酸发酵参考环境：5100吨罐，搅拌转速100转/分，通风
15、量1：1/分,罐压0。7公斤，pH在3左右,培养基主要成分为液化淀粉14，各种无机盐适量,发酵菌种采用黑曲霉, 发酵产酸温度为3436，发酵周期90小时。谷氨酸发酵参考环境：5100吨罐，搅拌转速100转/分，通风量1：1/分,罐压0.7公斤， pH在7左右，培养基主要成分为葡萄糖13，硫酸镁0.08%，磷酸二氢钾0。08,糖蜜0.05，氯化钾0.1%，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌，发酵周期30小时。赖氨酸发酵参考环境:5100吨罐,搅拌转速100转/分，通风量1：1/分，罐压0。7公斤， pH在7左右，培养基主要成分为葡萄糖14%，硫酸镁0。04%，硫酸铵2%，硫酸氢二钾0.1%，尿素0。4%，豆饼粉0。5，发酵菌种采用谷氨酸棒杆菌,发酵周期35小时。种子培养基：葡萄糖15 g，(NH4)2SO4 04 g，MgSO47H2O 40 mg，玉米浆20 g，尿素01 g,CaCO3 30 g,乙酸铵0.1 g，K2HPO43H20 0。15 g，盐酸豆饼水解液0。86 mL，水100 mL，
