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1、常用溶液的配制一、常规溶液（一）l/15mol/L PBS（磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution, PBS）甲液：1/15mol/L NaHPO 溶液24Na HPO9.465g24蒸馏水加至1000ml乙液：l/15mol/L KH PO 溶液24KH P09.07g24蒸馏水加至1000ml分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表：pH甲液ml乙液mlpH甲液ml乙液ml5.292.597.56.8150.050.05.595.095.06.9860.040.05.9110.090.07.1770.030.0
2、6.2420.080.07.3880.020.06.4730.070.07.7390.010.06.6440.060.08.0495.05.0（二）0.3 %台盼兰染液称取台盼兰（Trypan blue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣， 装入瓶内室温保存。（三）0.5%酚红指示剂酚红0.5g0.1N（0.4%）Na0H15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNa0H溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶 解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。（四）5.6%NaHC0 溶液3称NaHCO 5
3、.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4C冰箱3保存）（五）10g/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4C冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。（六）0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。（七）2 %柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。（八）0.2%次甲基兰染液称次甲基兰（Methylene blue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。（九）0.5%醋酸洋红（Aceio Carmine）染液洋红lg醋酸90ml蒸
4、馏水110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱 和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室 温存放时间越长效果越好，室温保存。（十）1% 甲苯胺兰（Toluidine blue）称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。（一）1/3000中性红染液取中性红（Neutral red）0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。（十二）Giemsa染液1 贮备液Giemsa 粉1g纯甘油66ml甲醇66ml先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放
5、入56C 温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。2.工作液临用时将贮备液与PH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。（十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液苏木精1.0g乙醇50ml醋酸5ml甘油50ml硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容 器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液, 并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右， 成熟的染液为深红色。二、细胞化学和细胞组分分离溶液（一）M 缓冲
6、液3.404g3.7g101.65mg380.35mg29.224mg0.07ml297ml加至1000ml眯唑（Imidazole）KCIMgCl 6H O2 2ECTAEDTA巯基乙醇甘油蒸馏水用lNHCl调pH至7.2室温保存。（二）2%Triton X 一 100 溶液量取2mlTriton X 一 100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M缓冲液98ml即可。（三）0.2%考马斯亮兰R-250染液醋酸考马斯亮兰蒸馏水7.0ml0.2g加至100ml(四) A. 0.1%碱性固绿染液(pH8.08.5)1. 0.1 %固绿水溶液固绿(Fast green) 蒸馏水0.1g100ml2. 0.
7、05%NaC0 溶液23Na C023蒸馏水用时按1:1体积混合即可。B. 0.1 %酸性固绿染液(pH2.2)1. 0.1 %固绿水溶液。2. mol /LX75 盐酸液50mg100ml盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml 用时按1：1混合。(五) 甲基绿一哌咯宁染液1.1mol /L 醋酸缓冲液(pH4.8)：(1) 醋酸蒸馏水(2) 醋酸水蒸馏水用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。17ml加至200ml13.5g加至lOOml2 .甲基绿一哌咯宁（methyl greenPyrcnln）5%哌咯宁水溶液2%甲基绿水溶液蒸馏水lmol/L醋酸缓冲液6ml6ml16
8、ml16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。(六) Schiff试剂将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50C时过滤到棕色瓶中, 加1N HC11O毫升，冷却至25C时加入1克NaHSO，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)3加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。(七) 联苯胺混合液联苯胺(4.4 Diamino benzidine)95%乙醇3%过氧化氢此液临用时配制。(八) l%番红水溶液0.2glOOml2滴番红(Safranin)蒸馏水1.0g100ml（九）1 %SDS（十二烷基硫酸钠
9、 Sodium dodecyl sulfate,SDS）SDS45%乙醇10g100ml（十）lmol /LTris（三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液 Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL）pH7.8Tris12.114glOOml蒸馏水先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml （十一）Ringer Solution氯化钠（冷血动物用0. 65克）氯化钾氯化钙蒸馏水（十二）淀粉肉汤培养基蛋白淀粉 牛肉汤 用 10%NaHCO 调 pH 至 7.07.23（十三）0.25mol / L蔗糖一 0.003mol / L氯化钙溶液
10、蔗糖氯化钙蒸馏水（十四）1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿（Janus green B）1.0g Ringer 氏液 100ml（十五）1%刚果红染液刚果红蒸馏水（十六）Gomori硝酸铅作用液0.05mol / L醋酸缓冲液（pH5）0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其0.9克0.042 克0.025 克100ml2g6g100ml85.5g0.33g1000ml1g100mllOOml42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml2gB-甘油磷酸钠2g5ml醋酸铅5 %氯化镁 以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2,过滤使用。（王世藩汇编）三、细胞培养和细胞融合溶液（一
11、）0.01mol / LPBS（磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer Saline， PBS）pH7.2。0.2mol / L磷酸氢二钠液（甲液）：35.814g加至500mlNaH PO 12H O242双蒸水0.2mol / L磷酸二氢钠液（乙液）：15.601g加至500mlNaHPO 12H O242双蒸水取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保 存于4C冰箱备用。（二）50%PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500）称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37
12、C予热的MEM培养液，混匀，保 温在37C水浴中待用。（三）MEM培养液（含10%小牛血清）MEM培养液（日本制药株式会社） 双蒸水NaHCO3谷氨酰胺（L-glutamin）56C灭活30分钟的小牛血清110ml9.4g1000ml1.5g0.292gMEM粉末加水溶解后，用NaHCO调pH到7.1（因在抽滤过程中pH升高0.20.3），然后加灭活的小牛3血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G抽滤除菌，分装，置4C冰箱保存备用。6（四）0.25 %胰蛋白酶一 0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶（Trypsin）粉EDTA 粉0.25g20.0mgO.Olmol / L PBS100ml先用
13、少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37C水浴中1小时左右（待 彻底溶解，液体呈透明为止），用G抽滤，分装置4C冰箱中保存。5（五）Hanks 液1原液甲NaCl160gKCl8gMgSO7H O2g42MgCI6H O2g2 2溶于800ml馏水中。CaCl （无水）2.8g2溶于100ml蒸馏水中。将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。原液乙Na HPO 12H O3.04g242KH PO1.2g24葡萄糖20.0g溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5%酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2m
14、l氯仿防 腐，置4C冰箱备用。2 使用液甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4C冰箱中保存。 使用时用5.6%NaHCO调pH值到所需要求。3（六）1640培养液（含lO%小牛血清）RPMI-1640 粉10.39g双蒸水加至1000ml通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。用NaHCO*5克调pH值到72双抗1万u/ml灭活小牛血清混匀上述液体，立即用G抽滤除菌分装，610ml110ml置4C冰箱备用。（七）青、链霉素溶液 青霉素钠盐（40万u /瓶）链霉素（100万U/瓶）2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水，分装小瓶，-30C保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。（八）二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4%。
