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1、探究 牛奶中的物质并测定其含量姓名：方娜学号：2023314003 学院：生命科学学院 专业：食品科学与工程 地址：山西大学指导老师：李晨（）摘要：牛奶中含有各类活性物质，例如：水、脂类、蛋白质、乳糖等。各类物质的含量不一，利用不同的方法可以测定出不同物质的含量。此次试验要论述的就是牛奶中水分、脂类、酪蛋白、乳糖的含量的测定，并且观察乳糖的糖脎和葡萄糖的糖脎的不同形态。（）关键词：牛奶；水；脂类；酪蛋白；乳糖；糖脎（）引言：通过本次试验学习和掌握牛奶中水分测定的方法，学习和掌握用索式提取器提取脂肪的原理和方法，学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法，学习和掌握牛奶中乳糖分离的方法，观察糖脎的形状。
2、Abstract: milk contains various active substances, such as: water, lipids, casein, lactose. Various substances differ, using different methods can determine different substance content. This test is about water, milk, casein, lactose lipid content determination, and to observe the lactose osazone an
3、d glucose osazone form different.Key words: milk, water, fat,casein , lactose, osazoneIntroduction: through the experiment study and master the methods of moisture determination in milk, learn and master the Soxhlet extractor for extracting fatty principle and method, learning the preparation of cas
4、ein from milk principle and method, to learn and master the lactose in milk separation method, observation of osazone formation.材料: 1.设备层析滤纸、烘箱干燥器、分析天平、索式提取器、恒温水浴锅、试管、过滤装置、抽滤装置（布氏漏斗）、离心管（50ml）、离心机、小烧杯2.试剂 蒙牛纯牛奶、无水乙醚、无水乙醇、醋酸醋酸钠缓冲溶液（0.2mol/l pH4.7） 乙醇：乙醚1：1混合液、pH7的缓冲溶液（如H3PO4缓冲液、50微克/毫升牛血清蛋白、50微克/毫升酵母
5、核酸、50微克/毫升牛血清蛋白和50微克/毫升酵母核酸的混合物内容方法：1、牛奶中水分及粗脂含量的测定1.1试验目的学习和掌握牛奶中水分含量的测定的方法学习和掌握用索式提取器提取脂肪的原理和方法1.2试验原理粗脂肪是脂肪游离脂酸、蜡磷脂、固醇及色素等脂溶性物质的总称。索式提取器是一回流装置，由浸提管、小烧瓶及冷凝管组成。浸提管两侧分别有虹吸管及通气管。含有样品的滤纸包放在浸提管内，试剂盛于小烧瓶中，加热后，试剂蒸汽经通气管至冷凝管，经冷凝后滴入浸提管浸提样品，浸提液不断积生，至发生虹吸，溶于浸提液的样品一起流入小烧瓶。如此反复提取回流，可将样品中的粗脂肪提尽，带入小烧瓶，可通过小烧瓶质量的增加
6、或滤纸包质量的减少来测定粗脂的含量。1.3试验方法水分的测定取一张烘干至恒重的层析滤纸，称重为m滤纸，向滤纸上滴加新鲜的牛奶（约4g），记下m牛奶，放入70烘箱，烘干后，称滤纸与牛奶干物质的质量，记为m前=m纸+干物质则m水=m滤+m牛奶-m滤+干物质。1.3.2粗脂提取与测量将洗净的索式提取器烘干，连接，向小烧瓶中倒入1/22/3的体积的石油醚，将有干物质的层析滤纸用普通滤纸包好（注意高度不要超过虹吸管）放入浸提管，水浴锅加热回流24小时，控制水浴锅的温度，以每小时回流35次为宜，。提取完毕，石油醚完全流入小烧瓶后，取出滤纸包，晾至无石油醚味后放置70度烘箱烘20分钟称量提取后滤纸与干物质质
7、量，记为m后。则m粗脂=m前-m后2、牛奶中酪蛋白的制备2.1实验目的学习从牛奶中制备酪蛋白的原理及方法。2.2实验原理蛋白质是由氨基酸构成的高分子化合物。蛋白质同氨基酸一样是两性电解质，调节蛋白质溶液的pH值可使蛋白质分子所带的正负电荷数目相等，即溶液中的蛋白质以兼性离子形式存在，在外加电场中既不向阴极也不向阳极移动。这时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L，酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物等电点为4.7，利用pI时溶解度最低的原理将牛奶的pH调到4.7时酪蛋白就会沉淀出来，用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类后就可得到纯的酪蛋白。2.3实验步骤调pH量取15
8、ml牛奶于50ml小烧杯中40度水浴在搅拌下加入预热至40度的醋酸缓冲液15ml，此时有絮状的蛋白质沉淀析出，室温放置分层，3000r/min离心15min，得到酪蛋白粗品，上清留作糖脎制备。水洗用蒸馏水洗涤粗品三次，分别离心10min，得到沉淀蛋白。去脂将粗制品加入10ml无水乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转入布氏漏斗中，抽干，（用乙醚：乙醇=1:1的溶液洗涤沉淀2次，用乙醚洗涤沉淀2次，抽干）待完全风干后称量，计算酪蛋白含量（g/100ml）并和理论含量3.5g/100ml,作比较计算实际得率。提取量（g/100ml）=酪蛋白（g）/15ml100ml得率%=提取量/理论含量100%3、牛奶
9、中乳糖的分离及糖脎的制备将上试验中上清加入CaCO3粉末，倒入蒸发皿煮沸，趁热过滤，滤液浓缩至5ml，取0.5ml做糖脎反应，剩余回收，回收的乳糖溶液加20ml乙醇，封口，4度放置12天，收集结晶，洗涤晾干后，称重，计算得率。乳糖鉴定：糖脎反应:去两个小试管，分别加0.5ml葡萄糖溶液和乳糖溶液，再加入1ml盐酸苯肼溶液，煮沸2030min，冷却后，于显微镜下观察糖脎晶体。结果与分析：1牛奶中水分含量：=3.1944g=2.5517gm前=m纸+干物质=2.9800gm后=2.7879g2.牛奶中酪蛋白的提取率与得率：提取量（g/100ml）=得率%=图2 葡萄糖结晶图1 糖脎结晶3.糖脎：讨论：由于在进行酪蛋白提取时没有对脂质进行清除，导致粗提的酪蛋白中含有粗脂使得实验中测得的酪蛋白含量偏大，最终导致计算的得率大于100%参考文献：1.国家精品课程配套教材 生物化学实验（第四版）2.日 菅原洁副岛正美著，张旭译； 蛋白质的定量法（第2版）；农业出版社；1981.9： 1641673.侯志敏 徐书英 酪蛋白的提取及检测 实验室科学 2006年4月第2期4. 陈钧辉 陶力 李俊 朱婉华 袁玉荪 生物化学实验 北京：科学出版社，2003.4 P265. 周夏衍夏春兰楚延锋付晓平 邓立志周鑫玉牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定大学化学第21卷第3期
