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1、#1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)#组份浓度：1MTris-HCl 配制量：1L配制方法：1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。pH 7.4 HCl 70ml; pH 7.6 HCl 60ml; pH 8.0 HCl 42ml4.加水将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.
2、03个单位。#10&timeTEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 组份浓度：100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：1L 配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。#1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度：1.5MTris-HCl 配制量：1L配制方法：1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值
3、，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。#3M醋酸钠(pH5.2)#组份浓度：3M醋酸钠 配制量：100ml配制方法：1.称量40.8gNaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。#Tris-HCl平衡苯酚#配制方法：1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等
4、氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。加入羟
5、基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤。加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法：1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/
6、氯仿/异戊醇（25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。#10M醋酸铵#组份浓度：10M醋酸铵 配制量：100ml配制方法：1.称量77.1g醋酸铵置于100200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。#10%(W/V)SDS#组份浓度：10%(W/V)SDS 配制量：100
7、ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。#2NNaOH#组份浓度：2NNaOH 配制量：100ml配制方法：1.量取80ml去离子水置于100200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。#2.5NHCl#组份浓度：2.5NHCl 配制量：100ml配制方法：1.在78
8、.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N)，均匀混合。2.室温保存。#5MNaCl#组份浓度：5MNaCl 配制量：1L配制方法：1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。#20%(W/V)Glucose#组份浓度：20%(W/V)Glucose 配制量：100ml配制方法：1.称取20gGlucose置于100200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.高温高压灭菌后，4保存。#SolutionI(质粒提取用
9、)#组份浓度：25mMTris-HCl（pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose配制量：1L配制方法：1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml)。#SolutionII(质粒提取用)#组份浓度：200mMNaOH，1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌#SolutionIII
10、(质粒提取用)#组份浓度：3MKOAc,5MCH3COOH配制量：500ml配制方法：1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压灭菌后，4保存。X-Gal储存液：N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解X-Gal粉末，浓度为20 mg/ml，-20避光保存。1.1TE/LiAc: 1.1ml10TE，1.1ml 1mol/L LiAc，用ddH2O定容到10ml。1PEG/LiAc: 8ml 50% PEG3350, 1ml10TE, 1ml1mol/L LiAc。#0.5MEDTA(pH8.0)#组份浓度：0.5
11、MEDTA 配制量：1L配制方法：1.称取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。#1MDTT#组份浓度：1MDTT 配制量：20ml配制方法：1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。3.适量分成小份后，-20保存。#10mMATP#组份浓度：10mMATP配制量
12、：20ml配制方法：1.称取121mgNa2ATmiddot;3H2O，加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。#10TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。2YT培养基将下列组分溶解在0.9
13、L水中：Tryptone16gYeastextract10gNaCl4ml如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加Agar12g/L,上层琼脂平板添加琼Agar7g/L。#PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO41.42g，KH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温
14、保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：Tryptone 10g；Yeastextract 5g；NaCl 10g如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加Agar 12g/L,上层琼脂平板添加Agar 7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：Tryptone 20gYeastextract 5gNaCl0.5g1mol/LKCl2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小
15、份中加1ml灭过菌的1mol/LMgCl2。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/LMgCl2外，再加2ml灭菌的1mol/LGlucose（18gGlucose溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：Tryptone12gYeastextract24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：
