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1、1 目的 规范微柱凝胶技术检测操作。2 适用范围 采用微柱凝胶技术进行抗人球蛋白试验。3 职责 检测者负责按此程序进行微柱凝胶技术操作。4 材料与设备 Biovue 工作站系统（包括孵育 器、离 心机）、微柱凝胶卡 （Anti-IgG,-C3d;polyspecific）、低离子增强液（BLISS液）、微量加量枪、吸头等、KUBOTAKA-2200 型离心机、0.9%无菌生理盐水；根据检测需要准备相应的抗血清及试剂红细胞。 5 操作方法5.1 待检标本的准备及要求5.1.1 患者血清准备 不抗凝血样3-5ml,退缩充分，离心3000rpm/5min分离出血清备用。5.1.2 红细胞悬液的准备
2、EDTA抗凝血样3400rpm/2min （KA-2200型离心机III档离心2次） 压积红细胞。取另一小试管作好标记加入190ul生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配 制成4%红细胞悬液；或加入1ml生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成0.8%红细 胞悬液。5.2 直接抗人球蛋白试验5.2.1 取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.2.2 加入 4%待检红细胞悬液 10 ul；5.2.3 离心5min，观察结果。5.3 间接抗人球蛋白试验（添加法）5.3.1打开孵育器将温度设定为37C ；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.3.2 每孔加 BLISS 液 50ul；
3、5.3.3 加入10ul4%红细胞悬液、或者20ul抗体筛选试剂红细胞（sanquin公司）、或者25ul 反定型试剂O细胞（北京金豪公司）；5.3.4 加入患者血清或试剂抗血清 40ul；5.3.5 37C孵育15min，离心5min，观察结果。5.4 间接抗人球蛋白试验（重悬法）5.4.1 4%红细胞1ml加入3ml生理盐水，900g离心5min，弃上清加入4mlBLISS液，配制 成浓度为 1%的红细胞悬液；5.4.2打开孵育器将温度设定为37C ；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条;5.4.3加入1%的红细胞悬液40ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；5.4.4 37C孵育15m
4、in,离心5min，观察结果。5.5 间接抗人球蛋白试验（酶处理法）5.5.1打开孵育器将温度设定为37C ；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；5.5.2加入4%的酶处理红细胞悬液10ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；5.5.3 37C孵育15min，离心5min，观察结果。6 结果判定 凝集强度判定参考下图标准阳性结果 红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。无论是否发生凝集 溶血的存在视为阳性结果。阴性结果 无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在相应的抗原。7 注意事项7.1微柱凝胶卡室温应在剥除铝箔纸1小时之内使用试剂卡。如果柱内的试剂液面位于或低于玻
5、璃珠的顶端，请勿使用该试剂卡。7.27.3加样时请勿让移液器吸头接触到反应腔的侧壁，一旦发生触碰，请在向下一反应腔中加 样之前更换吸头。加样后应确保反应物在反应腔中进行孵育，离心前反应物不能与微柱中的抗人球蛋白试剂相混合。7.4 质量控制 设置阳性对照用含有 IgG 抗体的人血清或血浆及相关抗原阳性的红细胞 进行抗IgG活性分析。然后BLISS添加法或重悬法执行实验；设置阴性对照一一使用不 含有非期待红细胞抗体的人血清和血浆及未致敏的红细胞。然后按照BLISS添加法或重 悬法执行实验。7.5 实验结束后，从微柱的正、反两面判读凝集和/或溶血结果，在有较强阳性反应的试剂 卡一侧读取并记录反应强度。8 依据BIOVUE SYSTEM HAND-BOOK CONTENTS
