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1、微生物学实验室常用试剂与培养基 / 第一节 常用试剂及其使用方法一、诊断用纸片 杆菌肽纸片（0。/片）:抑菌圈10mm为敏感。质控菌株： 群链球菌阴性， A群链球菌阳性. SZ纸片（1.25/片、275g/片)：出现抑菌圈即为敏感.质控菌株：D群链球菌阳性， A群链球菌阴性。 新生霉素纸片（5.g片）:抑菌圈1mm为敏感。质控菌株：表皮葡萄球菌阳性, 腐生葡萄球菌阴性。 O1纸片、奥普托欣(Oochin）纸片：参见第五节生化试验培养基。二、诊断用血清1。沙门菌属诊断血清 AF群O多价诊断血清.特异群因子诊断血清：常用的有O2，O4，O，O9，10诊断血清. 特异H因子诊断血清 常用的有Ha,H
2、b，Hc，d,Hgm，Hi，Hf、Vi因子诊断血清。 2.志贺菌属诊断血清志贺菌属种多价血清：痢疾志贺菌、血清,福氏志贺菌多价血清及分型血清(16型），宋内志贺菌诊断血清,鲍氏志贺菌多价血清及分型血清.致病性大肠埃希菌诊断血清肠致病性大肠埃希菌(E)诊断血清，产肠毒素大肠埃希菌(ETEC）诊断血清，肠侵袭性大肠埃希菌(IEC)诊断血清,肠出血性大肠埃希菌（EC）诊断血清O157: 。 。霍乱弧菌O1、O39混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清 5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清 6链球菌分类诊断血清 7肺炎链球菌诊断血清8.耶尔森菌诊断血清三、常用染色液。革兰染色液 结晶紫溶液
3、A液：结晶紫 g，95%乙醇2 l;B液：草酸铵 0。8g,蒸馏水0 ml。染色前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。 碘液：碘1g，碘化钾2，蒸馏水300m。将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml. 脱色液：5乙醇复染液:沙黄.5，95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml，加蒸馏水90ml为应用液。2.抗酸染色液 碱性复红染色液： 萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液，%石炭酸溶液90ml. 脱色液:浓盐酸ml,9
4、乙醇ml.复染液(吕弗勒美蓝液）：美蓝乙醇饱和溶液30ml,00/L氢氧化钾溶液01ml，蒸馏水0l. 金胺O罗丹明染色液： 罗丹明B液:罗丹明B 0。1g加蒸馏水10ml。/L金胺O液：金胺O液。1g加蒸馏水5l，再加入纯石炭酸 5l，混匀。3%盐酸乙醇.稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液10m，加蒸馏水9l,混匀。.鞭毛染色液（改良u法)液:5%石炭酸10ml,鞣酸g，饱和硫酸铝钾溶液 10ml； 液：结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份，B液1份，混合，室温存放备用。4.异染颗粒染色液甲液：甲苯胺蓝。5g，孔雀绿 2g/,95 乙醇2.0l，蒸馏水100l。乙液：碘 2,碘化钾3g，蒸馏水300ml
5、。 先将碘化钾加入少许蒸馏水（约2l），充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后，加蒸馏水至300m。5荚膜染色液 印度墨汁或0g/L黑色素水溶液 gL苯胺蓝水溶液。第二节 基础培养基一、液体基础培养基1蛋白胨水用途用于细菌靛基质试验；一般细菌培养和传代. 配法 蛋白胨(或胰蛋白胨)10,氯化钠 5g,蒸馏水L.将上述成分溶于水中，校正H 至7.,分装试管，每管23m,置2灭菌15min备用. 质量控制大肠埃希菌生长良好,靛基质阳性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴性。2营养肉汤用途 一般细菌的增菌培养,加入1的琼脂粉亦可作营养琼脂。配法 蛋白胨10，牛肉膏3g，氯化钠g，蒸馏水L。 将上述成
6、分称量混合溶解于水中，校正pH至。，按用途不同分装于烧瓶或试管内.经1灭菌15mi，作无菌试验后冷藏备用. 质量控制金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好.保存 置冰箱3周内用完。 3。牛肉浸液培养基用途 细菌培养最基础的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。 配法 新鲜除脂牛肉 500,氯化钠5g蛋白胨0g，蒸馏水1L。 先将牛肉清洗,除脂肪、肌腱,并切块绞碎。称取00g置容器加入蒸馏水1,搅匀后置冰箱过夜,次日煮沸加热30in，并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤，再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10、氯化钠5g溶解后,用氢氧化钠溶液校正H至
7、767。，并加热煮沸0mi，补充蒸馏水至L，最后用滤纸过滤,呈清晰透明、淡黄色液体,经1215min灭菌备用。用法根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其它培养基。如制作固体培养基，加入琼脂12gL即可。质量控制 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好.保存 置4冰箱内可以使用较长时间。注:商品牛肉浸膏粉，一般使用量为35g/.二、固体基础培养基1营养琼脂用途 一般细菌和菌株的纯化及传种. 配法 蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠g,琼脂粉(优质)12g，蒸馏水1L。 将上述成分(除琼脂外）溶于水中，校正 7。7.4后加入琼脂，煮沸溶解，根据用途不同进行分装,经12
8、1灭菌15min，倾注平板或制成斜面，冷藏备用. 质量控制 金黄色葡萄球菌菌落呈浅黄色; 痢疾志贺菌菌落无色;铜绿假单胞菌 菌落无色或浅绿色.保存置4冰箱保存，2周内用完。2.血琼脂培养基用途 一般病原菌的分离培养和溶血性鉴别及保存菌种.配法H74。6牛肉浸液琼脂 0m，脱纤维羊血(或兔血) 5.将血琼脂基础经12灭菌1n,待冷却至50左右以无菌手续加入羊血，摇匀后立即倾注灭菌平皿内，待凝固后,经无菌实验冷藏备用。 质量控制 化脓性链球菌AT 965生长良好,溶血；肺炎链球菌ATCC 303生长良好,-溶血;表皮葡萄球菌AT 1222 生长良好，不溶血。保存 置4冰箱，1周内用完。 巧克力琼脂
9、培养基用途 主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增殖培养。 配法 鲜牛肉浸出液1L， 蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂粉12g，无菌脱纤维羊血或兔血100m。将上述成分（除兔血外）加热溶解，调p至7.2，置121m高压灭菌,待冷至约85，以无菌方式加入兔血，摇匀后置8水浴中，维持该温度1n,使之成巧克力色。取出置室温冷至约50，倾注平板或制成斜面备用. 质量控制 流感嗜血杆菌ATC 1011、肺炎链球菌CC 6305生长良好，菌落典型。保存置4冰箱，1周内用完. 4.胱氨酸胰化酪蛋白琼脂用途常用于测定脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及营养要求较高细菌的糖发酵试验. 配法 胱氨酸05g， 胰化酪
10、蛋白2g，氯化钠5,亚硫酸钠3g，琼脂35g，酚红0.0175g，蒸馏水L。将上述成分（酚红除外）混合溶解,调H至7。2,加入酚红指示剂.分装试管，115灭菌5min。用法用于测定糖发酵时，按需要加入各种糖溶液，将待检标本直接种于培养基管内，置35孵箱,824h观察结果。培养基由红色变为黄色为阳性，不变色为阴性。第三节 保存和增菌培养基一、菌种保存培养基 配法 蛋白胨1，牛肉膏5,氯化钠3,磷酸氢二钠2,琼脂粉。5g，蒸馏水1 。 将上述成分混合于水中，加热溶解,调pH至747。6,分装试管23左右高度,1高压灭菌5n，成为半固体培养基,备用. 质量控制 培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(A
11、CC 5922）生长良好,动力阳性;福氏志贺菌(TC 1202）生长良好,动力阴性;金黄色葡萄球菌（TCC2593）生长良好，动力阴性。二、增菌培养基 1.葡萄糖肉汤用途 用于血液增菌。 配法 蛋白胨（或月示 胨）0，氯化钠5,肉浸液(或心浸液)1,葡萄糖g，枸橼酸钠3g，5g/L对氨基苯甲酸水溶液10，1mo/L硫酸镁溶液20ml,青霉素酶10 U。 将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨苯甲酸及硫酸镁,继续煮沸5i，并补足失水，调整pH至78。过滤分装,每瓶0ml，高压灭菌1152min后,每瓶加入青霉素酶50 ，经无菌试验合格后，冷却备用。 用法 将采取的血
12、液标本，以无菌手续注入培养瓶中(血液1ml，培养液10ml),置3培养箱内,每天1次取出观察结果。如有细菌生长,可出现数种不同的表现，应随时作分离培养，可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶,需连续观察，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中,至少应作两次分离培养.注: 枸橼酸钠为抗凝剂,可使血液加入培养基中不凝固。 对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。 硫酸镁主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。 本培养基近年来有许多改良配方，如加入.3。酵母浸膏以增加营养；加0。2核酸刺激细菌生长；加。粘液素能被覆于细菌的表面,保护
13、细菌免受抗体破坏;加入聚茴香脑磺酸钠（SS）能中和补体的抗药作用从而提高检出率。 血液增菌培养基 用途 血液和骨髓液病原菌的增菌培养. 配法 蛋白胨0g，氯化钠5g,牛肉膏3g,葡萄糖1，酵母膏粉3g，枸橼酸钠g，磷酸氢二钾2g，5/L对氨基苯甲酸溶液5ml，1/L硫酸镁溶液20l，4/L酚红溶液6m,青霉素酶50 U,聚茴香脑磺酸钠（SPS) 0.g，蒸馏水1L。 将上述成分（除酚红指示剂、青霉素酶外)混合加热溶解，校正pH至7.4,再加酚红，过滤分装每瓶50l，经11灭菌15mn和3524h无菌试验备用。临用时每瓶加入1。2。5青霉素酶。质量控制 伤寒沙门菌ATCC 5009、白色念珠菌ATCC 1023、化脓性链球菌ACC 15、肺炎链球菌ATCC 63、
