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1、叶片荧光测量实验报告1.实验目的2 .实验方法利用PAM100,荧光成像系统测量叶绿素荧光3 .实验原理及一些参数的意义荧光的变化反映光合与热耗散的变化。光化学淬灭(PhotochemicalQuenching):由于光合作用引起的荧光下降，反映了光合活性的高低。qP=(Fm,-Fs)/Fv,=l-(Fs-Fo,)/(Fm,-Fo)(基于“沼泽模型”)qL=(Fm,-F)/(Fm,-Fof)-Fo/F=qPFo/F(基于“湖泊模型”)非光化学淬灭(Non-PhotochemicalQuenching):由于热耗散引起的荧光下降。qN=(Fv-FvJ)/Fv=l-(Fm,-Fo)/(Fm-Fo)
2、NPQ=(Fm-Fm,)/Fm,=Fm/Fm,-1,不需测定Fo,适合野外调查qN或NPQ反映了植物耗散过剩光能转化为热的能力，反映了植物的光保护能力。Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm:PSII的最大量子效率，反映植物潜在最大光合能力，高等植物一般在0.8-0.84之间，当植物受到胁迫(Stress)时，Fv/Fm显著下降。中PSII=Yield=(Fm,-Fs)/Fm,=AF/Fm*=qP-Fv1/Fm,:任一光照状态下psn的实际量子产量(实际光合能力、实际光合效率)不需暗适应，不需测定Fo,适合野外调查。Y(NPQ)=/(NPQ+1+qL(Fm/Fo-l):调节性能量耗散,PSII处调节
3、性能量耗散的量子产量。若Y(NPQ)较高，一方面表明植物接受的光强过剩，另一方面则说明植物仍可以通过调节(如将过剩光能耗散为热)来保护自身。Y(NPQ)是光保护的重要指标。Y(NO)=l/(NPQ+l+qL(Fm/Fo-l):非调节性能量耗散psn处非调节性能量耗散的量子产量。若Y(NO)较高，则表明光化学能量转换和保护性的调节机制(如热耗散)不足以将植物吸收的光能完全消耗掉。也就是说，入射光强超过了植物能接受的程度。这时，植物可能已经受到损伤，或者(尽管还未受到损伤)继续照光的话植物将要受到损伤。Y(NO)是光损伤的重要指标。P：光合速率，即相对电子传递速率rETRPm:最大光合速率，即最大
4、相对电子传递速率rETRmaxa：初始斜率，反映了光能的利用效率b：光抑制参数Ik=Pm/a:半饱和光强，反映了样品对强光的耐受能力。测量参数光源配参数意义测量光作用光饱和脉冲光远红光暗适应参数FoJ初始荧光：psn反应中心（经过充分完全喑适应以后）处于完全开放状态时的荧光产量FmVV最大荧光：psn反应中心处于完全关闭状态时的荧光产量（通常叶片经过30n）in暗适应以后测得）光适应参数1FmVVq九迂应下的最大英九FsVJ稳态荧光：光照条件下，光暗反应达到动态,稳定时的荧光产量FoVJ光适应下最小荧光CD(竭4克比)去部泡和脉冲光开远红光时间图4一4叶绿素荧光分析方法示意图,AL:作用光ML
5、:检测光SP/P+Fsp:饱和脉冲光注：光化学淬灭可以被一种短饱和脉冲光（0.2-1s）暂时完全抑制，剩余的荧光淬灭就是非光化学淬灭。（叶绿素a荧光理论及其应用X西斌）4 .实验步骤4.1 Dual-PamlOO的操作步骤4.1.1.1 打开Dual-PamlOO的界面，更改下面参数:Mode:fluo+P700;Meanslight:fiuo-int=10P700-int=5Actlight:Act.red.right-int=17Farredlight=5Width=40sSatpulse:P+F+spint=10;4.1.1.2 点Light,进入界面，再点edit进行下面参数的编辑：I
6、ntense1,4,8,12,14,16,18,19,20Time2,2,2,2,2,2,2,2,2,之后的全部设置为0;4.1.2进入测定界面开始测定4.1.2.1 回到slowkinetics界面点击Fo,Fm（确定Y（II）值。.8-0.85之间）一点Bal（平衡光系统I,H）一点Pm（待回复灰色）一点start（过4s后）一点A1作用光（过3min半）一点P+F+sp饱和光（此时一般会观察到红色曲线达到平衡）一过30s左右关掉A1（曲线会下降）一再过lmin左右（曲线平稳）一点stop一在当前界面点击曲线保存按钮保存曲线。4.1.2.2 回至ijlightcurve界面点Bal一点st
7、art（出现对话框newFo,FmandPm-determindtion点NO）一等曲线绘成后点report保存数据一数据保存后手动清空当前界面数据。4.2荧光成像系统的操作先打开荧光成像仪再打开电脑对应系统一将叶片按要求放在叶室；4.2.1进入setting界面如下调整参数:Frequence=l;Meas.Light-int=1Act.light-int=19widths=O;ImageCorrection=MAXI;ImageTransformation=Rotate180Battery=16.3V;Imar CE&on lmQC TrtnslormtlionOKP Rotate 180
8、1MMF Minorit MAXI-Batteiy |l6.3VMeasure) Help2 nM |lt 习NoFlDelay 9Clock t可FIntecvil1 XJsDuration315 ：!_ Booster$Help Red Gato30 Red Intensity1NIR Intensity23 ：$M M$eSlow InductionG9 Speedfo.lmPS Iwmi 如Reset OetaultSettings|1J11 omf Factor.MlAlv FmfadofGain=1Damping=2Sat.Pulse-int=10No=lIntervals=30;
9、SlowInduction-Delays=40clocks=20Durations=315;Absorptivity-RedGain=30redIntensity=3NIRIntensity=23:Display=ColorGoSpeed-PSLimit=50；（其他的参数基本不变）4.2.2 Imaging界面点Reset-点Add（增加测量部位，可多个添加）-点MeasureAbs（吸光度）一点Fo,Fm一点Report（将该界面右侧荧光参数值全部勾选）一保存相应的数值；4.2.3 回到Lightcurve界面或kinetics界面点Start（等到20s）一点Al（过3min半）一点SAT-Pu/se（打饱和光）-在当前界面保存图像一在Report界面保存相关数据；4.测量结果数据分析5-
