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1、二十四、HE染色：1?伊红染液配方：称取伊红2g,溶于5ml蒸馏水，逐滴加入冰醋酸，边加边搅拌至糊状，再加入数毫升蒸馏水，继续滴加冰醋酸至沉淀不再增加，过滤，将沉淀和滤纸一起置于50-60C温箱中烘干，溶于400ml95%的酒精中。2?苏木精染液配方：A液：苏木精2g;无水乙醇250ml。B液：钾矶（硫酸铝钾）17.6g;水750mL。具体步骤：分别按以上配方配好A液和B液，并混合后加入碘酸钠0.2g，冰醋酸20mL染液配好后,将瓶口用裹着棉花的纱布塞紧,放在暗处通风的地方,并经常摇动以促进它的成熟。成熟时间约1个月。此染液需要提前1个月配置好,备用,如果想要促进它的成熟,可在染液里加入0.2
2、g碘酸钠。此染液染核效果良好,染色均匀,不会发生沉淀,而且可以长期稳定保存。此染液可同时与伊红等进行细胞的染色。整个染色过程包括五个内容：脱蜡复水、染色、脱水、透明和封片。1?脱蜡复水：a.65C温箱烤片30min后，石蜡切片经二甲苯I、H脱蜡各510min,b.石蜡切片依次各级浓度酒精复水：经100%酒精-100%酒精-95%酒精80%酒精70%酒精50%酒精蒸馏水，各1-2min。2?染色：a.苏木精染色约4min。染色时间主要根据染色剂的成熟度以及室温高低，可以适当缩短或延长（现在的成熟度4min左右）。b.水洗5-10minc.脱水I切片经50%乙醇70%乙醇80%乙醇95%乙醇，各1
3、-2min。d.复染伊红染色10s-20s，着色以较浅为宜。3?脱水用95%乙醇洗去切片多余的红色，然后放入100%无水乙醇两次各1.5min,共3min。4?透明：切片依次经乙醇-二甲苯等量混合液1.5min、纯二甲苯I5min、H5min。二甲苯要定期更换，切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。5?封片滴加中性树胶,注意组织不能有气泡。轻压盖玻片可赶走气泡。二十六、免疫组化1?脱蜡复水a.65C温箱烤片30min后，石蜡切片经二甲苯I、H脱蜡各510min,b.石蜡切片依次各级浓度酒精复水：经50%酒精+50%二甲苯100%酒精100%酒精95
4、%酒精80%酒精70%酒精50%酒精蒸馏水,各90s。2?抗原修复：10mM柠檬酸钠微波炉高火保持沸腾不少于20min,沸腾需要8-10分钟，大约共30min。一般每次7min，四次。3?PBS清洗2-3次，每次2min，注意力度，你可用力过大，组织不能干。4?封闭：滴加3%出。2，现用试剂盒阻断剂，室温避光孵育10-15min，阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS清洗3次，每次2min。5?孵育一抗：将一抗按一定比例稀释（需摸索，大多抗体1：:100稀释较好，稀释液可为PBS或一抗稀释液），37C孵育2h或4C过夜。6?PBS清洗3次，每次2min。7?滴加试剂盒增强剂室温孵育20min,PB
5、S清洗3次，每次2min。8?孵育二抗：将二抗按一定比例稀释（1:200）,室温静置或37C1h或直接购买中杉金桥的即用型二抗试剂，37C30min。9?PBS清洗3次，每次2min。10?DAB显色：将A、B液按一定比例（1:20）混匀,在显微镜下掌握染色程度，出现黄色立即终止染色。一般5min-10min。肉眼观察有颜色差异即可终止染色，一般不超过10min，染色时间灵活，最短有过2min。现配现用。11?自来水冲洗5-10min。12?复染：苏木精复染约90s（颜色要浅）。13?PBS或自来水冲洗5-10min。14?脱水、透明：石蜡切片依次经各级浓度酒精脱水：经50%酒精70%酒精80%酒精90%酒精95%酒精100%酒精100%酒精50%酒精+50%二甲苯各90s。二甲苯I二甲苯H,各5min。15?封片、镜检
