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1、USPCylinder-plateassay美国药典管碟法（标准曲线法）1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml）,分别为S1、S2、S3、S4和S5,其中S3为中间浓度。除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，具中不相连的三个分别加入Si（i为1、2、4或5）,另外三个不相连的加入S3。待检样品（Unknown）加样方式如Si,具体放置方法如下图1:图1 ：标准及样品管碟放置方式图例Replicate1Replicate2Replicate32、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例：下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果:
2、表2:抗生素效价检测测量结果表备注：Zonel、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值;Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；U1表示待测样品1。2.1进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9个Si和U1直径的平均值。例如：15.867=(16.1,15.6,15.8,16.015.8)9个数据的平均值14.167=(14.6,14.1,13.5,14.514.1)9个数据的平均值2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差(包括标准对照和样品的)进而计算出其相对标准偏差值(RSD,该值应不超过10
3、%)。例如：标准偏差0.200=s(16.1,.,15.8)相对标准偏差1.3%=(0.200/15.867)*1002.3 进行平板间的差异校正:计算公式如下。Xc=Xs(XRP)Xc=标准品平均值的校正值Xs=原始的标准品的平均值Xr=对照值的平均值P=校正值例如：14.022=14.167-（15.867-15.722）=14.167-0.1452.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意-可以使用自然对数或底数为10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果）例如：下表3是针对下列
4、计算中会用到的数据从表2中截出的部分。表3:标准曲线数据表StandardSetCorrectedzoneMeasurements(mm)Concentration(U/mL)Si14.0223.2414.9894.0Reference(5J15722516.5116.25&17.222Z8125图4：线形回归结果抗生素效价标准曲线0 8 6 4 2 2 1111 )mj直圈菌抑正校2.5标准曲线：Z=3.5502*ln(C)+9.97942二校正抑菌圈大小C=浓度R2=0.99682.5 待测样品效价：估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值(三个平板的)。用上面介绍的标准
5、品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。注意一另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S3的对数值在估计效价的回归线中进行校正。在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值LU。Lu=(Z-a)/ba=回归线的截距b=回归线的斜率要得知待测样品的效价，取Lu的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。例如：待测样品校正值(表2中)=15.522待测样品效价的ln值：Lu=(15.522-9.978)/3.5502=1.562待测样品效价值：Cu=e1.562=4.765待测样品效价与对照中间浓度的百分比为：(4.765/5.000)*100%=95.3%精品资料WelcomeToDownload!欢迎您的下载，资料仅供参考！
