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1、纤维素降解菌的分离和筛选1. 实验目的：1.掌握纤维素降解菌的的分离和筛选的方法2. 学会会培养基的制备3. 再次了解菌落的形态2.实验原理： 从美术楼后面树林中取适量的土壤，用无菌水将得到的样品经适 当稀释，在28C下培养Id,稀释10-6、10-7、10-8三个浓度，分别接 种于鉴别培养基中培养，每组3个平行，在37C下培养2-3 d,然后 进行初筛，重复以上步骤，直至获得纯的菌株。最后镜检。3.试验方法：1. 取样先从树林中取10g 土壤（1015cm深）。用灭菌的塑料袋盛装。 2饥饿培养秤取 10g 土壤，置于 250ml 的装有 90ml 无菌水的锥形瓶中，摇匀， 在37C下培养1d
2、。3. 梯度稀释所需仪器：试管（8 支）、洗耳球、移液管。 需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装 9ml 蒸馏水）、移液 管。用移液管从饥饿培养土壤液中吸取 1ml 土壤悬液加入盛有 9ml 无菌 水的试管中充分混匀。然后用移液管从此试管中吸取 1ml 加入另一 盛有 9ml 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成 10-1，10-2，10-3， 10-1，10-2，10-310-4，10-5，10-6，10-7，10-8 不同稀释度的土壤溶液。4. 选择培养刚果红培养基的制备所需要的仪器有：500ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、 称量纸等。(NH4)2SO42gMgSO40
3、.25gKH2PO41g明矶2g纤维素钠1.88g刚果红2g琼脂18g蒸馏水1000ml按上表比例配制150ml选择培养基。在500ml锥形瓶中装入150ml 培养基，用 2 层纱布加棉花做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包 裹两层报纸，用线绳扎紧，在121C下高压蒸汽灭菌20min。灭菌后, 倒 9 个灭菌平板，凝固后待用。2 涂布平板将上述已倒培养基的 9 个平板底面分别用记号笔写上 10-6、10-7、 10-83 种稀释度（每个稀释度划 3 个平板）。然后用移液管分别由 10-6、 10-7，10-8 三管土壤稀释液中各吸取 0.2ml 对号放入已写好稀释度的平 板中，用无菌涂布器在培养
4、基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置 510min,使菌液吸附进培养基。38C倒置培养2-3d，至菌落长出, 产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。c3菌落形态观察划线分离PDA培养基的制备方法马铃薯 2oog纤维素（cmc）若干克琼脂15-20g蒸馏水1000ml马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤，再加琼脂， 融化后不足水至1000ml。121C灭菌30min.按以上比例配置50ml培养基，分别倒入3个灭菌的平板当中， 待凝固后，从以上涂布的9个平板当中取出1个菌落周围的透明圈 比较大的平板。用接种环挑取菌落在平板培养基上进行梯度划线。 连续做3个平行，置于38C下培养。重复以上步骤，进行连续3次纯化培养。直至获得纯的菌株。c5斜面培养选取透明圈大且降解能力强的菌株以待划线时使用。如上面制备PDA培养基，将其倒入1支灭菌试管里，每管约倒入1/3 的培养基，倾斜置放，30min之后，带其凝固，用接菌环挑去少量菌 落划线培养，做3个平行。置于38C下，培养2-3d。直至长出菌落。5.镜检所需仪器或试剂：菌种的平板培养物、番红、显微镜、酒精灯、载玻片、接种 针、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、蒸馏水等。操作步骤：制作（挑取、印染）一-染色（番红）一-静置1Omin-冲洗（蒸馏水）一-加 片（盖玻片）镜检结果：从形态和印片染色看，该菌属于放线菌。
