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1、凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号 的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的 10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200 克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15, G-25，G-50，G-75，GT00，GT50，和 G-200。因此，“G” 反 映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。SephadexLH-20，是一SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于 水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，
2、Sepharose （瑞典，pharmacia）， Bio-Gel-A （美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的 次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓 度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如 水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40C以上开始融化， 也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙 烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂 的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯 酰胺凝胶的商品为生物胶一P（Bio-GelP），由美国Bio-R
3、od厂生 产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P后面的数字再乘1000 就相当于该凝胶的排阻限度。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用 于分离分子量1600到40, 000, 000的生物大分子，适用于有机 多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好， 洗脱剂可用甲基亚砜。三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管 或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大， 可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加 样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外，直径加大，洗脱 液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决
4、于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:110:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时 柱高与直径之线为20:1100:1,常用凝胶柱有50X25厘米， 10X25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌 滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其 结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离 时，死体积不能超过总床体积的1/10000（二）凝胶的选择根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。一般葡聚糖凝
5、胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍，例如SephadexG-20的吸水量为20，1克SephadexG一200吸水后形成 的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度 细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采 用100-200号筛目的的SephadexG-200效果好，脱盐用 SephadexG-25、G-50，用粗粒，短柱，流速快。（三）凝胶的制备商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使 用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可用加热法，即在沸水浴中 将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在1-2小 时内即可完成。特别是在使用软胶时，自然膨胀需24小时至数
6、天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。（四）样品溶液的处理样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去， 如含脂类可高速离心或通过SephadexG-15短柱除去。样品的粘 度不可大，含蛋白为超过4%，粘度高影响分离效果。上柱样品 液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体 积为凝胶床的1-4% （一般约0.5-2ml）,进行分族分离时样品液 可为凝胶床的10%，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的 20-30%。分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出 的峰形较好。（五）防止微生物的污染交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类
7、物质， 防止微生物的生长，在凝胶层析中十分重要，常用的抑菌剂有：叠氨钠（NaN3）在凝胶层析中只要用0.02%叠氮钠已足够防 止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在20C时约为40%；它不 与蛋白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力； 不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光 标记蛋白质。可乐酮Cl3C-C（OH）（CH3）2在凝胶层析中使用浓度为 0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶 液中或温度高于60C时易引起分解而失效。乙基汞代疏基水杨酸钠在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为 0.05-0.01%。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基 代疏基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低 它的抑菌效果。苯基汞代盐在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01%。在微碱 性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用 而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降 低或抑制它的抑菌作用。
