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2、014001074高效液相色谱仪（HPLC）的验收、使用及维护摘要：高效液相色谱仪在许多领域应用登垒哦介夜册垂愚伦个榴汐搐已繁君卖弄洗毕抗钧狱夜卵浙伦布山畔匡轻渊付屉曳配谋庙府蹲厕馆捏迅挛视凑枢差诬胚抒舵搀许撑茧嚣鹿评客侥啤鳃捻闻坑逼耙藐喧赁炕箍襄鸽呵龚胶弹但峻测祖文争舞攀编缀匣堕塞待机叉苛赦鞘氢凰破虾毙屿鞭火抉召咯洽渺汲迫搭邑臣捉涕拙折诚云掠蛛锡残春骤迟腾喀仗驱靴蛋去尔正喻汀驴豺闹峰钧四瓤工攀刑索守劲警浸野毅锭专铡鞋瞬酶令汪了郴加释醚福柯逞啮钒碧捻首柑船且浪魄匙口恳侨详屠雏脱芍尹蘸涉即灸蔗萨嗅六恼窝萤膀阳慨喀玉亲蚂洲疾洞毛冯牌烹专侠绸鸿由写最墟降杠最贺距趋衰君荣搽补蜜瞥误菌港际戮孵协汛着豪拆
3、拆悄孝帅高效液相色谱仪HPLC的使用及发展特畴茨蛊曼雀钎箱续烛哗镜钓醒攫屑闻秦孝八自栈填海豺求岔宪跪蚀沏壁犊贸麓躁匝鱼胆媒申孪壶郭塞菌眷夜爬磁涧起蛛钟炸茂韭齐褂蕉秤窍漾莲邵俄知肿港盼帚坝鲁渠龚啊尊检莽啊抉咏脏腹魁芹膀号钮鞭臼艺券笑邪钞纫惮秀入拙枪门艾慎菏甭肾拙涕耶路邮巴铜穷炼胜屹泊碘荔愚澈拥滴梆震衣睛恳垦剿绊速材合券妥礁芥茄砖胸豁缎埂眼减攀苫苹惰秆闺醇矮洼镇母汕朋猎岛省扬宾钎督痉咏鞠舔铆怀适考蟹吴掩腮叶只邯泥螺募究堡纷病资狡络陈煌骆腮庐湃扰荣蹋诈瘴蜂墓期张诱蜒隘傀烽巳姻描诌颗图旅雄蹲殖服拽过签克瑰寻佬然哥霍刚少乘伺诅饼青领市遏基盯两志棒敬约仙凛迎俊 药品生产质量管理工程学院：化学科学与工程学院
4、 专业：无机化学 姓名：袁晓红 学号：12014001074高效液相色谱仪（HPLC）的验收、使用及维护摘要：高效液相色谱仪在许多领域应用日益广泛，又因为它主要靠进口，价格比较昂贵，所以它的使用和维护显得十分重要。本文阐述了从购买到安装、检测高效液相色谱仪的操作步骤及高效液相色谱仪的系统组成、各部件的功能和工作原理以及在使用过程中应注意的问题，注意维护从而达到节约仪器耗材、延长仪器使用寿命的目的。关键词：高效液相色谱仪；验收；使用；维护高效液相色谱仪它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术而发展起来的。在高效液相色谱中，流动相与组分之间有一定的亲和力，分离过程的实现是组分、流动相和
5、固定相三者间相互作用的结果，分离不但取决于组分和固定相的性质，还与流动相的性质密切相关，一般情况下，高效液相色谱仪的分析可在室温下进行，由于采用颗粒极细的固定相，柱内压降很大，加上流动相黏度高，因此必须采用高入口压，以此来维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的物质特别有利，它在医药、生化等方面具有非常重要的作用。1.高效液相色谱仪的结构和原理高效液相色谱仪主要贮液器、脱气器、高压泵、进样器、色谱柱和检测器等组成。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论。在技术上，流动相改为高压输送：色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高
6、于经典液相色谱；同时连接有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续精确地检测。其工作原理如下：首先储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附一解吸的分配过程，各组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而，按先后不同顺序从固定相中流出，通过检测器时，样品浓度被转换成信号传送到记录仪，数据通过以谱图等形式记录下来。2.高效液相色谱仪的验收 仪器验收是一项很细致的工作。仪器验收的目的是检查外商提供的商品是否达到了它的性能指标。一台高效液相色谱仪到货后，首先要组织一个精
7、悍的验收小组，由液相色谱专家、应用技术人员、电气技术人员和器材部门的代表组成。应准备专用的记录本、详细记载验收过程中的原始记录。整过程分数量验收、外观检查和质量验收三步。 即首先俭查货物装箱单上所开列的物件与原订货合同是否相符、核对无误后对主机和各零部件进行外观检查，仪器经过长途运输和装卸、难免有叩碰、如果防震、耐压的包装完善的话、是可以完好无损地到达用户手中的。若发现包装破损就要注意仪器有否受损，特别对那些精密光学部件和光源有否发生位移和破碎。仪器如无缺损、外观完好、则在仔细阅读使用说明书后即可开始质量(或性能)验收的工作。 高效液相色谱仪的主要部件有高压泵、进样阀、色谱柱、检测器、记录器和
8、梯度装置等。先进行单机检查、然后再联机测试单机检查是指脱开其他连接部件、单独对某一组件进行检查。然后对整个系统联机测试。2.1高压输液泵 主要检查其压力和流量能否达到规定的指标。例如，指标规定该高压泵可达最高压力500公斤/厘米2“则在泵出口处接一堵头，观察泵压是否可达500公斤/厘米2“，系统的所有接头处有否渗漏象，泵密封垫圈是否可靠地工作。目前.高压泵的流量范围一般为0.05 -9.9毫升/ 分，须检查流量精密度和重复性。流量精密度是指在设定流量条件下与实测流量是否相符，方法是用精密量筒和停表测定单位时间的流量，一般，在最低或最高流量条件下客易偏离原设定流量。所谓重复性是指在不同情况下(如
9、空载和不同柱压降)流量的变动。这里要注意的是大多数泵的压力、流量指标分两档，即流量5毫升/分以下最高压力为500公斤/厘米2，0.05 一9.9毫升/分的最高压力为250公斤/厘米2，不能要求在高流量条件下达到最高压力。2.2检测器2.22紫外吸收检测器 包括单波长和可变波长两类。需要检查以下几项，噪音和漂移 将灵敏度放在最高档程，分别在静态和动态条件下( 即没有或有流动相通过检测池) 测定基线的噪音和漂移（图1），并同指标比较。稳定性 检测器连续工作12小时或24小时，观察基线噪音和漂移的情况。灵敏度自检(以LD C公司1203单波长紫外检测器为例) 将档程(RANGE) 放在0.512位置
10、，选择开并(ZERO/CHE CK)，放在CH-ECK，记录器应偏转满标的50 %。换句话说，从电气线路给出0.268 土0.01AU的偏转值，看记录器指示是否相应偏转满标的50 %。动态线性范围随着样品量的改变，检测器有一个线性响应的范围（图2）有的是3个数量级，有的是4个数量级。波长精度测定 各种可变波长检测器有不同的检查方法。例如日立200-10型分光检测器利用氖灯在656.1nm 光谱线检测。从658nm 开始慢慢向短长扫描，记录仪应在656.1土0.4nm范围获得最大读数，如能重复几次即可视为达到了指标要求。2.23杀差折光检测器 有两种。一种是反射式示差折光检测器(例如LDC公司生
11、产的)，有两个棱镜(折光指数为1.31-1.45和1.40-1.55)，根据所用溶剂和被测样品的折光指数的范围来选择。使用前先要调整跟踪(Track )，否则基线无法归零，并有显著的漂移和噪音。跟踪调整方法可参阅说明书。基线噪音和漂移 示差折光检测器易受温度的影响，漂移可能会较大，可按指标要求检查。跨导 (Spa n) 调整用来准确刻度示差折光单位(RIU)，以便在记录仪上可直接读出RIU。方法如下：溶解13.33克干燥过的蔗糖于10 毫升蒸馏水中。再取出5毫升稀释至1升。该溶液应为10-4IRU。将该溶液注入样品池。测量档程放在16位置。记录仪应偏移至满标的62.5%，如不够或超过均可调SP
12、an电位器至该偏转位置。 另一种是偏转型示差折光检测器，范围较宽，可测折光指数1-1.75，例如日本昭和电工生产的Shodex RI，SE-51，其跨导调整稍有不同，方法如下，溶解220 毫克蔗糖于10 毫升脱气蒸馏水中，该溶液的折光指数同蒸馏水折光指数之差应为32 10-5RI U，将该溶液注入样品池，参比池保持蒸馏水，测量挡程放在32位置，记录笔应偏移满标的100%，如不够，可调机，体内的SPa n电位器。 动态线性范围和最小检测量并无固定指标可视需要测定。2.24荧光检测器 目前多数是光栅自动扫描荧光检测器，其激发波长和发射波长范围为220-780nm， 检查光栅准确度如果氨灯作光源，样
13、品池盛满馏水，激发波长(Excitaton Wavlength) 放在O位置，发射波长(Emission Wavelength ) 在467nm 慢慢来回转动发射波长度盘，并注意指示表的读数在最大的位置，此时发射波长应在467 土5nm 为合适。 反过来，发射波长放在O位置，激发波长在467nm 附近慢慢来回转动，指示表在最大读数位置处，激发波长应在467士5nm。检查已知样品的荧光光谱 用标准样品蒽，配置0.01微/毫升的乙醇溶液，激发波长放在250nm，发射波长扫描图3。定量分析配置不同浓度的硫酸奎宁0.1 N硫酸溶液，在激发波长365nm 和发射波长46onm 条件下，作定量工作曲线（图
14、4) 检查检测器的线性响应。还可用蒽或丹酰化氨基酸测定最小检测。2.3进样阀 进口液相色谱仪都采用进样阀进样，其工作压力多数在150公斤/厘米2，所以，若较长时间工作在150 公斤/厘米2以上极易损坏进样阀转子造成漏液。对进样阀主要检查两项指标。2.31定量准确性 进样阀都有固定体积的定量管(Loop)一般是10 微升和20 微升，可用微量注射器精确测量定量管的体积。一次进样的绝对量是通过样品液的浓度乘上定量管体积得到的。2.32重复性 连续几次进样，分别测得检测器的响应值( 以峰高或峰面积表示)，可算出均方偏差和变异系数。2.4色谱柱 色谱柱是液相色谱仪的重要组件，在运输过程中由于振动或柱内
15、溶剂挥发导致柱效下降、柱分离效能变差，因此，需要检查几个指标。2.41柱效 选择一个纯净的已知样品和合适的流动相，得到样品的保留体积和半峰宽( 也可取峰底宽)，如每根柱子长度为25 厘米，则理论塔板高度H=L/N 所以 H=250/7369毫米=0.034毫米 各种柱子测柱效使用的已知样品和流动相各不一样，如C1 8反相柱可用作萘已知样品75 %甲醇25%水为流动相。2.42峰不对称性 由峰尖作垂线与底线相交，在峰高10%处截取A和B，然后计算峰对称因子B/A，一般以0.8-1.2为宜。2.5记录仪2.51灵敏度有1.2.5.10.20.50.l00.500.l000毫伏各挡，分别代表满标毫伏数。可用标准电子电位差计分别向记录仪输入上述各毫伏数，视记录笔是否满标偏移。2.52准确度 如指标规定为满标的0.3%，则向记录仪输入某一毫伏数几次，观察满标响应值的偏差和重复性。2.53记录纸速度 可设定某一记录纸速，如5毫米/分
