《实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表（28页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1MTri-HCl口组份浓度 1 MTri-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 口配制量 1L口配置方法1.称量121.1gTri置于1L烧杯中。2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸 调节所需要的pH值。pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将 溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tri溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1C,溶 液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5MTri-HCl口组份
2、浓度 1.5MTri-HCl (pH8.8) 口配制量 1L口配置方法1.称取181.7gTri置于1L烧杯中。2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至 8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tri溶液的pH值随 温度的变化差异很大，温度每升高1C，溶液的pH值大约降低0.03个单 位。3、10 某 TEBuffer组份浓度 100mMTri-HCl，10mMEDTA(pH7.4，7.6，8.0) 口配制量 1L口配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。IMTri-HClBuffer （pH7.4
3、，7.6，8.0） 100mL500mMEDTA （pH8.0） 20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L 后，高温高压灭菌。4.室温保存。4、3M醋酸钠口组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）口配制量100mL口配置方法1.称取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL烧杯中，加入 约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。3.加入去 离子水将溶液定容至100mL。4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、PBSBuffer组份浓度 137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4， 2mMKH2PO4 口配制量 1L口配置方
4、法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约 800mL 的去离 子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子 水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6、10M醋酸铵口组份浓度10M醋酸铵口配制量 100mL口配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100200mL烧杯中，加入约 30mL的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用0.22 mm滤膜
5、过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tri-HCl平 衡苯酚口配置方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用 于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时 也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对其进行重蒸馏除去诸如 醍等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA 的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使 用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套 及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与
6、苯酚接触过的皮肤部位应 用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性 pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20C，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68C水 浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种 还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。 有助于方便识别有机相。 加入等体积的1MTri-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟， 静置使其充分分
7、层后，除去上层水相。重复操作步骤。加入等体积的0.1MTri-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分 钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤，稍微残留 部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。将苯酚置 于棕色玻璃瓶中4C避光保存。8、苯酚/氯仿/异戊醇口配置方法1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇 (25： 24： 1)。氯仿可使蛋白(25： 24： 1)质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配置方法：将Tri-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24： 1) 均匀混合后，移入棕色玻璃
8、瓶中4C保存。9、10%(W/V)SDS 组份浓度 10%(W/V)SDS口 配制量 100mL口配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入 约80mL的去离子水，68C加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。3.将溶液定容至100mL后，室 温保存。10、2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100mL配置方法1. 量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程 中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完 全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL4 .将溶液转移至
9、塑料容 器中后，室温保存。11、2.5NHCl口组份浓度2.5NHC1 口配制量100mL口配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸 (11.6N)，均匀混合。2.室温保存。12、5MNaCl 口组份浓度5MNaCl 口配制量1L口配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去 离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌 后，4C保存。13、20%(W/V)Glucoe组份浓度 20%(W/V) Glucoe2口配制量100mL口配置方法1.称取20gGlucoe置于100200mL烧杯中，加入约80mL
10、的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100mL。3.高温高压灭菌后，4C保存。14、SolutionI口组份浓度 25mMTri-HCl (pH8.0), 10mMEDTA, 50mMGlucoe(质粒提取用)口配制量1L口配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTri-HCl (pH8.0) 25mL0.5MEDTA (pH8.0) 20mL20%Glucoe (1.11M) 45mLdH2O910mL2.高温 高压灭菌后，4C保存。3. 使用前每 50mL 的 SoliutionI 中加入 2mL 的 RNaeA (20mg/mL)。15、SolutionII口组份浓
11、度 250mMNaOH，1%(W/V) SDS (质粒提取 用)口配制量500mL口配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。10%SDS50mL2NNaOH50mL2.加灭菌水定容至500mL,充分混匀。3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产 生气泡，不要剧烈搅拌。16、SolutionIII口组份浓度 3MKOAc, 5MCH3COOH (质粒提取用)口 配制量500mL口配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。3.加去 离子水将溶液定容至500mL。4.高温高压灭菌后，4
12、C保存。17、 0.5MEDTA组份浓度 0.5MEDTA(pH8.0) 口配制量 1L口配置方法1.称取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约 800mL的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值值8.0 (约20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将 溶液定容至1L5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。18、1MDTT组份浓度1MDTT配制量20mL口配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。2.加 20mL的0.01M的NaOAc (pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适
13、量分成小份后，-20C保存。19、10mMATP组份浓度 10mMATP配制量 20mL口配置方法1.称取121mgNa2ATP3H2O，加入到50mL塑料离心管内。2. 加20mL的25mMTri-HCl (pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份， -20C保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin组份浓度 100mg/mlAmpicillin (100mg/ml) 配制 量 50mL口配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22 mm 滤膜过滤除菌。4. 小份分装(1mL/份)
14、后，-20C保存。2、IPTG组份浓度 24mg/mLIPTG (24mg/mL) 口配制量 50mL配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3.用0.22 mm 滤膜过滤除菌。4. 小份分装(1mL/份)后，-20C保存。3、某-Gal组份浓度20mg/mL 某-Gal (20mg/mL) 口配制量 50mL口配置方法1.称取1g某-Gal置于50mL离心管中。2.加入40mLDMF (二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50mL。3. 小份分装(1mL/份)后，-20C保存。4、18培养基组份浓度1%(W/V) Tr
15、yptone，0.5%(W/V) YeatE 某 tract，1%(W/V)NaCl口配制 量1L口配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeatE 某 tract5gNaCl10g2.加入约 800mL 的去离子水， 充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH (约0.2mL)，调节pH值至7.0。4.高温 高压灭菌后，4C保存。5、LB/Amp 培养基组份浓度 1 %(W/V) Tryptone0.5%(W/V) YeatE 某 tract1%(W/V)NaCl0.1mg/mLAmpicillin配制量 1L口配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeatE某 tract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5NNaOH (约0.2mL)，调节pH值至7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。36. 加入 1mLAmpicillin (100mg/mL)后均匀混合7.4C保存。6、丁8培养基组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone2.4%(W/V) YeatE 某 tract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4口配制量 1L口配置方法1.配制磷酸盐
