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1、文档来源为：从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持SD大鼠一氧化氮（NO）酶联免疫分析试剂盒使用说明书96T本试剂盒仅供研究使用。检测范围:1呵ol/L-40mol/L使用目的：本试剂盒用于测定SD大鼠血清样本中一氧化氮（NO）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中SD大鼠一氧化氮（NO）水平。用纯化的SD大鼠一氧化氮（NO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮（NO）,再与HRP标记的一氧化氮（NO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色
2、的深浅和样品中的一氧化氮（NO）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中SD大鼠一氧化氮（NO）浓度。试剂盒组成标本要求130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(80jimol/L)0.5mlX1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlX1瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11圭寸板膜2张6显色剂B液6mlX1/瓶12密封袋1个1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含N
3、aN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40jimol/L5号标准品1501的原倍标准品加入1501标准品稀释液20imol/L4号标准品1501的5号标准品加入1501标准品稀释液10imol/L3号标准品1501的4号标准品加入1501标准品稀释液5pmol/L2号标准品1501的3号标准品加入1501标准品稀释液2.5pmol/L1号标准品1501的2号标准品加入1501标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在
4、酶标包被板上标准品准确加样50山,待测样品孔中先加样品稀释液40山,然后再加待测样品10d（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂10分钟.文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持50d，空白孔除外。A50d，再加入显色剂B50d，轻轻震荡混匀，37
5、C避光显色终止：每孔加终止液50d，终止反应（此时蓝色立转黄色）。10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀
6、释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）o5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8Co2有效期：6个月
