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1、名词解释1 DNS试剂:3,5-二硝基水杨酸试剂,与还原糖共热后被还原成棕黑色的化合物2 Km:米氏常数，是酶的一个特征常数大小反映了酶与底物亲和力的强弱。 Vmax：是酶被底物饱和时的反应速度，Km值的物理意义为反应达到1/2Vmax的底物浓度再增加底物对反应速度没有什么影响。反应速度逐渐趋近的恒定值称为最大反应速度Vmax。3 还原糖：是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的蛋汤和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。4 gel filtration:凝胶层析法，是利用凝胶吧分子大小不同的物质分离开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。5 Acr：丙烯酰胺，可与少量的交联剂甲叉双丙烯酰胺
2、（Bis），在催化剂的作用下聚合交联而成三维网状的聚丙烯酰胺凝胶。6 酶的比活力：在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。7 酶的活力单位: 是指在特定条件下(25、最适的pH值和底物浓度),每分钟可催化1微摩尔底物转化所需要的酶量。8 电泳：带电粒子在直流电场中向着 所带电性相反的电极移动的现象。9 层析（色谱）：用不同物质在不同相态的选择性分配,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，使混合物各组分以不同速度移动，从而达到分离的一种物理方法。10 分子筛效应：凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的
3、多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。11 电泳的原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。12 凝胶过滤层析的原理：一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。凝胶过滤层析
4、具有分子筛效应13 按层析过程的机理，层析法分哪几类？按操作形式不同又分哪三类？：根据分离的原理不同分类，层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。按操作形式不同又分层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。14 可见分光光度计的使用注意事项？：（1） 使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。比色皿应该避免磨损透光面。（2） 使用过程中不得打开盖子，保持仪器清洁,为避免溶液洒落对仪器造成的腐蚀，所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作。比色皿放进样品池之前必须把外表面擦干。（3）当（仅当）操作者错误操作或其他干扰引起
5、微机错误时，应该立即关断主机电源，重新启动，但无须关断灯源电源。（4）光学器件和仪器运行环境需保护清洁。清洁仪器外表时 ,请勿使用乙醇乙醚等有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。15 蛋白质含量测定的常用方法有那些？：（1）微量凯式定氮法。（2）双缩脲法。（3）folin酚试剂法。（4）紫外分光光度法。（5）考马斯亮蓝染色法。16 双倒数法测定米氏常数的基本原理：Lineweaver和Burk将米氏方程改写成倒数形式：17 聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点？：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。电渗作用比较小，不易和样品相互作用。 由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合
6、成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。18 如何证明提取到的某种核酸是DNA还是RNA？（6分）：（1）用定糖法检测。（2）用紫外分光光度计检测。（3）用琼脂糖凝胶电泳检测。等19 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时，使用的电泳缓冲液PH8.3，那么样品应点在哪端？为什么？（6分）：样品应点在负极端，因为电泳缓冲液PH8.
7、3，在这样的环境中，血清蛋白的几种蛋白质电离后都带上负电荷，所以只有点样在负极端，外加电压后，才能向正极移动，彼此才能分开。20 凝胶电泳的一般操作步骤（11分）：制胶，加入电泳缓冲液，加样，电泳，剥胶，染色，脱色。21 要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液应如何配制？（10分）：准确称量0.2gNaOH用少量蒸馏水溶解，然后转入500ml的容量瓶中，再用蒸馏水少量多次（至少3次）洗涤烧 杯，都转入容量瓶中，最后定容至刻度线，盖好容量瓶后混匀即可。22 PI: 指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。23 层析：按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间
8、的分配比例将混合成分分开的技术。24 同工酶：能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。25 DNA变性：DNA双链解链，分离成两条单链的现象。26 Sanger试剂是2，4-二硝基氟苯27 肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？215nm28 酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？丝氨酸29 通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的Trp、Tyr、phe三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力30 移液枪在每次实验后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取强挥发性、强腐蚀性的液体。31 测定蛋白质浓度的
9、方法主要有双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法32 在分光光度计的使用或检定中，透射比或吸光度的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。透射比或吸光度的误 差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。33 紫外分光光度法测定核酸含量的原理。核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1g RNA溶液的光吸收值为0.0220.024，每1m1含1g DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值
10、即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光误差较大，故应设法事先除去。34 牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得，糖类小分子由于处于清夜中而分离，沉淀物中所含有的脂肪通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯白色、晶状酪蛋白。方法：取新鲜牛乳，用酸碱调PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。步骤：保温调PH沉淀离心洗涤干燥称量35 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在01000g范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的蛋白质常用分析方法。36何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？Rf为氨基酸的比移值。影响纸层析迁移率Rf值的主要因素：1、样品本身的性质和结构；2、溶剂的性质；3、PH值；4、温度；5、滤纸性质。
