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1、蛋 白 结 合 率 相 关 知 识血浆蛋白结合率：药物与血浆蛋白结合的程度，即血液中与蛋白结合的药物占总药量的百分数。血浆蛋白结合率为可逆性疏松结合，结合型药物分子量增大，不 能跨膜转运、代谢和排泄，并暂时失去药理活性，某些药物可在 血浆蛋白结合部位上发生竞争排挤现象。药物分子与血浆蛋白结 合的特点(和药物与受体蛋白结合情况相似)：具有饱和性与可 逆性、结合物无活性、有竞争置换现象。药物进入循环后，有两种形式：结合型药物：药物与血浆蛋白结合。特点：(1)暂时失去药理活性。(2)体积增大，不易通过血管壁，暂时“储存”于血液中。意义：结合型药物起着类似药库的作用。药物进入相应组织 后也与组织蛋白发
2、生结合，也起到药库作用，影响药物作用和作 用维持时间长短，一般蛋白结合率高的药物体内消除慢，作用维 持时间长。游离型药物：未被血浆蛋白结合的药物。特点：能透过生物膜，进入到相应的组织或靶器官，产生效 应或进行代谢与排泄。药物与血浆蛋白结合方式:酸性药物与白蛋白结合：华法林、磺胺类药物主要与血浆 白蛋白结合，三环类抗抑郁药、氯丙嗪也与白蛋白结合。碱性药物与 1-糖蛋白结合：B -糖蛋白和虽然量比白蛋白少 很多，但在癌症、关节炎、心肌梗死等疾病中可增高，能与奎宁 结合。特点：(1)可逆性药物与血浆蛋白的结合是可逆的，极少数是共价结合(如烷 化剂)。药物在血液中转运时，结合型与游离型药物快速达到动态
3、平 衡。游离型药物-透过生物膜-血液中游离型药物浓度降低一结 合型药物，释出游离型药物。(2)饱和性血浆中蛋白有一定的量，与药物的结合有限，因此，药物与 血浆蛋白结合具有饱和性。当药物浓度大于血浆蛋白结合能力时一饱和一游离型药物急 剧增加一毒性反应。某些病理情况下，血浆蛋白过少(如肝硬化、慢性肾炎)、 变质(如尿毒症)-药物与血浆蛋白结合减少一毒性反应。有些 药物在老年人中呈现较强的药理效应，与老年人的血浆蛋白减少 有关。(3)竞争性两种药物-竞争结合同一蛋白一置换一游离型药物浓度增加 一导致中毒。如：保泰松一结合型双香豆素游离型浓度增加一出血倾向。与内源性代谢物竞争与血浆蛋白结合，如磺胺药一
4、置换胆红 素-新生儿核黄疸症。止匕外，注射白蛋白可与药物结合而影响疗效。血浆蛋白与药物结合时，血浆蛋白在体内的各种作用暂时消失， 但是与药物分离之后，血浆蛋白各种性质基本不变，继续发挥原 来的作用。血浆蛋白结合率的测定1、实验目的测定磺胺喀咤钠在不同动物体内的血浆蛋白结合率。2、实验原理将蛋白置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。 蛋 白等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。当达 到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。 若系统中自由配基的总量 已知，测定不含蛋白隔室中自由配基的浓度， 即可推算与蛋白结合的 配基量。具有游离氨基的磺胺药在酸性介质中与亚硝酸发生重氮化反应
5、 后，可与N-（1蔡基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，与经过同样处理的磺胺药标准液比较， 用 721 分光光度计比色法测出组织中和不同时间的血液中磺胺嘧啶浓度。由于亚硝酸不稳定， 在实验中， 用三氯醋酸与亚硝酸钠反应制的得。剩余的过量亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。3、实验材料1、实验动物兔子一只。2、设备与器械712分光光度计、管状半透膜（周长5cmi长约12cm）、丝线、广口瓶、移液器。3、药物与试剂10%磺胺嘧啶钠注射液15%三氯醋酸溶液0.1%亚硝酸钠溶液0.5%氨基磺酸胺溶液0.1%二盐酸N- （1 萘基） - 乙二胺溶液磺胺嘧啶钠贮存标准液磺胺嘧啶钠应用标准液4、试验
6、方法1、试剂的制备0.1%二盐酸N（- 1 萘基）-乙二胺溶液： 0.5g 溶于 95%乙醇约400mL中，再用乙醇稀释至500ml,棕色瓶于冰箱中保存透析液（PB9 : pH7.4的0.02M磷酸盐缓冲液，内含0.15MNaCl磺胺喀咤钠应用标准液：10%（胺喀咤钠注射液3.75 ”溶于约80m13汇氯醋酸溶?再定容于100ml容量瓶中备用2、血浆制备兔心脏采血，肝素抗凝，以3000rpm离心10min,取上清液即为 血浆。3、透析将管状半透膜一端折叠，用纱线扎紧，保留结扎线段10cm左右，以调节袋内外液面在同一水平，加血浆样品 2.0ml 于上述半透膜袋内，并扎紧口袋另一端，袋口不得污染血
7、浆。将两端扎紧的半透膜置于盛有 9.75ml 透析液的 30ml 广口瓶中， 用袋两端线段调节袋内外液面， 加 0.05mg/ml 的磺胺嘧啶钠溶液0.5ml 于各瓶袋外透析液中。 置广口瓶于冰箱中，平衡透析约 60h 左右。吸出袋外透析液少许，加等量磺基水杨酸试剂，无浑浊，说明无血浆蛋白漏出。取出半透膜，用滤纸吸干袋外壁透析液， 小心解开透析袋， 使袋内血浆流入干净试管。4、用重氮化- 偶合比色法测定袋内外溶液中磺胺药浓度。取袋内外溶液各0.5ml ,加水15.5ml ;力口 15%氯酉昔酸4ml,混 匀，静置2min,过滤，取试管3支，各加入滤液5mL为测定管；取 试管3支，加入空白对照液
8、5mL为空白管；取试管3支，加入应用 标准液5mL为标准管，在以上各管中各加入 0.1%亚硝酸钠溶液0.5mL,混匀，放置3min,各加入0.5%氨基磺酸胺溶液0.5mL,混匀， 放置2min,各加入0.1%二盐酸N- （1秦基）-乙二胺溶液2.5mL,充分混匀，放置10min,用721分光光度计在550nrn&长处比色：以空白管校正光密度到0点，读取标准管和测定管光密度，并用公式计算： 测定管光密度游离磺胺药含量（mg% =x应用标准液浓度x样品稀释倍数标准管光密度5、计算血浆蛋白结合率。Dt-Dffb= x 100%Dtfb :血浆蛋白结合率；Dt:血药总浓度（透析袋内血浆药物浓度）；Df
9、:游离药物浓度（透析袋外缓冲液中药物浓度）五、实验结果1、结果记录表一：标准管和测定管光密度的测定结果样一样二样三平均值透析袋外 0.0060.0080.0110.008透析袋内 0.0650.0900.0610.072标准液 0.6900.7010.6800.6902、游离磺胺药含量的计算计算得：透析袋内药物浓度=0.000044mg/ml透析袋外药物浓度=0.00039mg/ml3、药物血浆蛋白结合率的计算结果：兔： fb=88.9%六、结果讨论与总结1、分光光度计的使用操作。由于应该使用一套比色杯来测定吸光度， 而在实际操作中比色杯使用混乱， 而且并没有做到严格的润洗， 所以吸光度的测量
10、存在较大的误差。分光光度计的使用应该注意的事项：（ 1）为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。（ 2）拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。（ 3）清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。（ 4） 测定有色溶液吸光度时， 一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。（ 5）在实际分析工作中，通常根据溶液浓度的不同，选用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.20.7。2、总结
11、动物的种属、 生理病理状态、 个体差异可以影响血浆蛋白结合率。理论上当蛋白浓度足够高时所有与蛋白作用的药物都能被结合。 但实际情况下，当亲和力较低时不可能达到这种所谓的足够高的蛋白浓度。 蛋白浓度一定时， 一定范围内当药物浓度增加结合的药量会随之增加，但结合分数降低。相反，当药物浓度下降时，结合分数增加并逐渐趋向于一个最大值, ，因此不同药物在低浓度时的最大结合率各不相同。 平衡透析法是一种相对简单不需要复杂设备的可行性强的操作方法。实验过程中所用三角瓶、 移液管、 试管等并没有经过彻底清洗会对实验结果造成影响， 不同的动物种类以及相同的动物的个体差异会对实验结果造成影响，还有操作人员的失误也会对实验结果造成影响， 药物浓度和血浆蛋白浓度对结合率都有影响。 在报导血浆蛋白结合率时，必须同时注明实验过程中所用的药物浓度和蛋白浓度。
