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1、实验八肝脏谷丙转氨酶活力测定1. 实验类型：验证性实验相关知识酶活力：2. 酶活力单位（即酶含量的多少）习惯单位：谷丙转氨酶在丙转氨酶活力单位3转氨酶国际单位度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷R|ICO一+COOH辅基为磷COOH4谷丙转氨酶一、实验目的了解转氨酶的性质及临床意义掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及a-酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。丙酮酸能与2,4二硝基苯肼结合，生成丙酸2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439530nm,
2、可用于测定丙酮酸的含量。a-酮戊二酸也能与2,4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm波长比色时，丙酸2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与a-酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。三、实验器材、试剂、材料1.新鲜猪猪脏2.722型分光光度计、剪刀、吸管3.标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；苯肼；0.4mol/LNaOH溶液0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）;0.02%2,4二硝基四、实验操作步聚肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝
3、脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液测定管标准管对照管空白管谷丙转氨酶底物（ml）0.50.5-混匀后，37度水浴准确保温5分钟稀释肝匀浆（ml）0.1-0.1-其他0.1标准丙酮酸0.1水混匀后，37度水浴准确保温30分钟2,4二硝基苯肼（ml）0.50.50.50.5谷丙转氨酶底物（
4、ml）-0.50.5混匀后，37度水浴准确保温30分钟0.4mol/LNaOH(ml)5.05.05.05.0静止10分钟A520-五、实验结果与讨论1.分析（列表）各管与计算实验结果（0D值）相关的物质成分。管别各管与实验结果有关的呈色反应空白管2,4二硝基苯肼+?标准管2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?对照管2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?测定管2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?2,4二硝基苯肼+?2. 每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物3. 作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
