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1、奶牛场口蹄疫免疫预防技术作者：王喜林来源：兽医导刊2019年第7期王喜林/中农威特生物科技股份有限公司口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性、热性、高度接触传染性且能快速 远距离传播的动物疫病。口蹄疫能感染猪、牛、羊等主要经济动物和野生偶蹄动物，易感动物 多达70余种。发病动物的主要症状是精神沉郁、流涎、跛行、卧地，在其口鼻部、蹄部和母 畜乳部等无毛部位发生水疱，水疱破裂后形成溃疡和瘢痂。口蹄疫的发病率高，但大部分成年 家畜可耐过。幼畜则经常不见症状而死，死亡率因病毒的毒力不同而有差异，严重时可达100%。 口蹄疫可造成巨大经济损失和社会影响。该病是世界动物卫生组织（OIE）
2、法定报告的动物传染 病之一。我国于2005年5月24日，中国农业部发布的动物病原微生物分类名录（农业部 第53号公告）中，将口蹄疫病毒列为一类动物病原微生物。口蹄疫也是中华人民共和国进 境动物一、二类传染病、寄生虫病名录中进境动物必须检疫的一类传染病。一、口蹄疫病毒（FMDV）口蹄疫病毒属微RNA病毒科的口疮病毒属（包括4种病毒，即牛鼻病毒A、牛鼻病毒B、 马鼻病毒A和口蹄疫病毒），口蹄疫病毒为典型代表毒株，也是人类确认的第一个动物病毒病 原，开创了病毒学新纪元，是研究最深入的动物病毒之一。1. 口蹄疫病毒结构。电子显微镜观察，口蹄疫病毒颗粒呈圆形，表面光滑，直径为27 30nm （图1）。病
3、毒粒子无囊膜，呈二十面体对称，由蛋白衣壳包裹基因组RNA组成核衣壳。 采用X线晶体衍射技术对多个血清型病毒衣壳的精细结构进行了解分析，衣壳由60个VP1、 VP2、VP3和VP4分子组成，其中VP1VP3位于病毒粒子表面，VP4位于内部，并有一个十 四烷基共价键连接到其氨基端。表面结构蛋白VP1、VP2和VP3立体结构相似，是由8个链状 B折叠桶（BB、BC、BD、BE、BF、BG、BH、BI）组成（图1-a），B折叠桶之间由 表面环结构所连接，表面环含有病毒重要的表位。例如，VP1的BG和BH之间的GH环含有 口蹄疫病毒最重要的抗原位点和识别整合素受体的RGD基序。VP1、VP2、VP3和V
4、P4各一个分 子组成一个原粒（图1-b,e），相对沉降系数为5S，分子量约为8000ku，5个原粒组成一个五 聚体（图1-c,f），相对沉降系数为14S，浮密度为1.5g/mL，分子量为3.8X106ku，12个五 聚体构成完整病毒衣壳。自然培养或采用基因工程方法可以获得口蹄疫病毒样颗粒，不含核酸 RNA，由VP1、VP3和VP0 （VP2和VP4前体）组成，沉降系数为75S，分子量为47X106ku。 病毒基因组由大约8400个核甘酸组成，为正链单股RNA分子。病毒衣壳和基因组共同组成完 整病毒粒子（图1-d,g），其表面不像其他微RNA病毒科成员有许多参与病毒受体结合的 沟或谷，而是相对比
5、较光滑的球面，表面有一细小的环状或纤突突起，五重轴中心点有一个小 孔，可以允许小分子进入病毒颗粒，如二乙烯亚胺（BEI）、氯化铯等可以进入病毒颗粒。完整 病毒粒子蔗糖密度梯度中的相对沉系数为146S，分子量为8.08X106ku，完整病毒颗粒146S （灭活疫苗的抗原）或75S空壳在酸性、碱性或一定温度条件下降解为12S和5S粒子，降解 后小分子（12S、5S）无免疫原性。 1 耶申电略谑丽h. e VFI. WLFJgYH*干营由房用的 x中g烛干弟可； r. MIRHJM9KSW； i. tM 制仙听取于电|1金咨花L WSm 乂阳K 曲如血知 H:仲口皿 qiSMH m&p1 哪、Ulf
6、ilFUK.2. 口蹄疫病毒的分类。血清型：1922-1953年，德、英、法三国学者发现并命名了口蹄疫 病毒的7个血清型即O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1型。至20世纪80年代后期已经 确定了 7080多个亚型，其中O型有1011个血清亚型，A型大约有32个血清亚型， C型有5个血清亚型，Asia1型有3个血清亚型。随着新毒株的不断出现，亚型分类越来越混 乱，现已放弃亚型分类，采用拓扑型分类。拓扑型：在Rico-Hesse脊髓灰质炎病毒基因分型的 基础上，根据变异度最大的VP1核酸序列，将同一血清型中关系密切的一组病毒分为不同拓扑 型，拓扑型毒株具有明显的地域性。目前。型口
7、疫病毒有10个拓扑型，A型有3个拓扑型、C型有8拓扑型、亚洲1型有1个拓扑型，SAT1、SAT2和SAT3分别有3、2和3个拓扑型。 我国曾经流行过的有0、A和亚洲1三个型，2018年7月1日亚洲1型退出免疫之后，主要 流行毒株为。型和A型，其中0型的流行毒株有三个拓扑型东南亚拓扑型（如 O/Mya98/BY/2010等）、中东-南亚拓扑型又叫泛亚拓扑型（如O/Ind2001等）和古典中国拓 扑型（如O/GX/09-7等）。A型的流行毒株只有一个拓扑型及东南亚拓扑型（如A/Sea-97/G2 等）。3. 口蹄疫病毒的易感动物及感染特点。口蹄疫的易感动物种类繁多。重要家畜如猪牛、羊 等都易感，其
8、中牛的发病率几乎达100%，其次是猪，再次是羊及20多科70多种野生动物。口蹄疫病毒变异性极强，其7个血清型之间不能产生交叉免疫，因此防治口蹄疫相当于防 治7种不同的传染病。同型内不同病毒株的抗原性也有差异，而新毒株又不断出现，每出现一 种新毒株，疫情就出现一次新高潮。口蹄疫病毒的感染性和致病力特别强。如一头牛只要吸入10个感染单位的病毒就可发病， 而病畜的排毒量又特别大，一头病猪每天仅从呼吸道排出的病毒就高达108个感染单位。一头 病猪一天呼出的病毒可使1000万头牛发病。口蹄疫有多种传播方式和感染途径。该病不但可通过与病畜接触传播，还可通过空气传播。 若气象条件合适，病毒可向下风方向传播几
9、十甚至上百公里的距离。口蹄疫的潜伏期短，发病急。动物感染口蹄疫病毒后最快十几小时就可排毒，处于潜伏期 的动物、发病动物及持续感染动物均可引起易感动物发病。动物机体对口蹄疫病毒的免疫应答程度较低。免疫注射动物，甚至发病后康复动物，再次 受到同源病毒攻击时只保持不再发病，其免疫系统不能完全抵抗病毒感染。二、奶牛发病时的临床症状在所有易感动物中奶牛最易感染口蹄疫病毒，感染后临床表现十分明显，以口腔和蹄部出 现水疱为主要特征。牛群一旦感染口蹄疫病毒，传染速度很快，出现相同症状的病牛数量急剧 增加。牛自然感染口蹄疫病毒时，潜伏期一般为214d，但是，随着环境的变化，潜伏期亦 可缩短或延长。患病初期，病牛
10、出现急性发热，体温可以升高至4041.5C，稽留14d。伴随精神 沉郁、脉博加快、黏膜潮红、反刍减弱和产奶量下降等症状。牛感染24h后出现病毒血症，在 病毒血症期间，从多数组织中可检测到病毒，其中蹄叉、蹄冠部和舌上皮组织中的病毒含量最 高。病牛蹄部病变主要发生在蹄叉、蹄冠及蹄踵和趾间隙的柔软皮肤，初期表现局部有热感、 红和疼痛，之后形成小水疱，继而融合为较大的水疱。水疱破溃时水液排出形成糜烂，其表皮 常不完全脱落而干燥形成硬痂，有时蹄冠部发生多处水疱，互相连接融合，引起蹄冠与蹄缘分 离，病愈后较长时间内，仍留有明显的缝隙和痕迹，病牛因蹄部疾患常常举步艰难。蹄部水疱 破溃后，若护理良好、保持清洁
11、干燥，经1014d可以自愈，否则病程很长，严重时，蹄匣 脱落。在蹄部发生水疱的稍前或同时，出现口腔病变，一般是在舌背面出现环形、粗糙的白色隆 起，随着液体的积聚，隆起增大，有时多个水疱相互融合，凸现于正常的舌面组织使舌面凹凸 不平。牛流出大量泡沫样口涎，并挂满口角与下唇。水疱破裂后，舌面露出红色烂斑。病牛多 因口腔疼痛不能吃草而日渐消瘦。水疱也会出现在齿龈、舌面、鼻镜、唇内、鼻前端及眼结膜 等处，水疱一般较小，为绿豆或指头蛋大小，破裂后形成局限性小烂斑。泌乳牛感染口蹄疫时，乳头皮肤亦可出现水疱。口蹄疫还会引起怀孕母牛流产、死胎或分 娩出带病毒的犊牛。此外，病变也见于鼻咽部、食道和瘤胃，亦见于母
12、牛阴道基膜和公牛阴囊 皮肤。成年发病牛的死亡率通常比较低，而发病犊牛死亡率高。新生牛呈急性经过而不形成水 疱性病损，经过12d，因心肌炎而死亡。成年病牛一般12周后即可痊愈，部分病例由于继发细菌感染，使病变过程复杂化， 口腔出现深层溃疡、坏死和脓肿，并可能发展为咽炎、支气管炎，肺水肿和肺气肿；蹄冠部化 脓，出现坏死性蜂窝织炎，发生感染的关节与腱鞘松弛，有时伴随败血症而导致病牛死亡。部 分病牛康复后，可能发生继发症，表现为精神沉郁，食欲减退，换毛过程停滞，奶产量降低。 有些病牛出现心肺性喘息和咳嗽，心博减弱，脉博无力，心悸亢进和心律不齐，瘤胃蠕动减弱， 有时出现抽搐兴奋或精神沉郁。三、口蹄疫免疫
13、技术目前，我国政府批准用于预防口蹄疫的疫苗包括单价、双价或三价灭活油佐剂疫苗、合成 肽疫苗及基因工程亚单位疫苗。其中合成肽疫苗仅用于猪口蹄疫的防控，基因工程亚单位疫苗 因其抗原分子量小、免疫原性弱而未能大面积推广使用。灭活疫苗因效果良好而且质量稳定， 是当前乃至今后畜牧业生产中预防口蹄疫的主要疫苗。1. 疫苗选择。2018年7月1日，我国宣布亚洲1型口蹄疫退出免疫，目前至今后主要 用于牛羊的口蹄疫疫苗有以下几种。1）牛口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗。O型、A型病毒，灭活前的病毒含量分别至少 107.0TCID50/mL，用于预防牛、羊O型、A型口蹄疫。注射后15d产生免疫力，免疫期为6个 月。牛
14、、羊深部肌内注射，6月龄以上牛4mL/头，6月龄以下牛和1岁以上羊2mL/头，6月 龄以下的羊1mL/只。2）口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+ReA/WH/09株）。本品系 用口蹄疫病毒O型O/MYA98/BY/2010株、重组A型ReA/WH/09毒株分别接种BHK21悬浮细胞，收获细胞培养物，分别经浓缩纯化、二乙烯亚胺（BEI）灭活后与ISA206佐剂按比 例混合乳化制成疫苗。用于预防牛、羊O型和A型口蹄疫，免疫期为6个月，肌肉注射，牛 1mL/ 头，羊 0.5mL/ 只。3）口蹄疫（A型）灭活疫苗（AF/72株）。本品系用牛源A型口蹄疫病毒AF/72株细
15、胞毒，接种BHK-21细胞，通过浓缩培养法培养，收获细胞培养物，经二乙烯亚胺（BEI）灭活 后，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防牛A型口蹄疫，免疫期为6个月，肌肉注射，6月 龄以上成年牛2.0mL/头，6月龄以下犊牛1.0mL/头。4）口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（O/HB/HK/99株+AF/72株）。本品含灭活的口蹄疫O 型（O/HB/HK/99株）、A型（AF/72株）病毒，灭活前的病毒含量分别至少为 107.0TCID50/mL。用于预防牛口蹄疫O型、A型病毒引起的口蹄疫，免疫期为6个月，肌肉注 射 2mL/ 头。5）口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（OHM/02株+AKTIII株）。疫
16、苗中含有灭活的口 蹄疫O型毒株（OHM/02株）和A型III系鼠化弱毒株（AKT-III株），灭活前的病毒含量均至 少为107.5LD50/0.2mL。用于预防牛、羊O型、A型口蹄疫，免疫期为6个月，颈部肌肉注射， 牛 2.0mL/ 头，羊 1.0mL/ 只。6）口蹄疫O型灭活疫苗（OJMS株）。本品系用口蹄疫病毒O型病毒接种BHK-21细胞培 养，收获悬浮细胞培养物，经二乙烯亚胺（BEI）灭活，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防 牛、羊O型口蹄疫，肌肉注射，牛2.0mL/头，羊1.0mL/只。7）口蹄疫O型灭活疫苗（OS株）。含灭活的口蹄疫O型病毒，灭活前每0.1mL病毒含量 应至少为107.0TCID50，或每0.2mL病毒含量应至少为107.0LD50。用于预防牛、羊、鹿和骆 驼O型口蹄疫，免疫期为46个月。肌肉注射，牛、鹿和骆驼2m
