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1、临床输血学实验指导实验一 血型鉴定目的要求 :掌握 ABO 血型的鉴定熟悉 Rh 血型的鉴定一、 ABO 血型鉴定1. 凡红细胞上具有 A 抗原者为 A 型 ; 有 B 抗原者为 B 型 ;A 和 B 抗原都没有者为 O 型 ;A 和 B 抗原都有者为 AB 型。2.ABO 血型检查法 :将被检者红细胞用生理盐水洗涤 1-2 次 , 配成 2-5% 悬液待用。(1) 正定型 : 取小试管二只 , 分别用记号笔标记后加抗 A 、抗 B 血清各一滴 , 然后各加受检者红细胞悬液一滴。(2) 反定型 : 取小试管三只 , 分别用记号笔标记后加受检者血清一漓 , 然后加标准 A 、 B 及O 型红细胞
2、各一漓。 将上述混匀后 , 静置数分钟 , 或 3 0 转 /min 离心 15 秒后 , 肉眼判断凝集度。结果判断 : 抗A血清抗B血清A细胞B细胞O细胞血型 +-+-A -+-B -+-O +-AB二、阳血型鉴定1.Rh 血型系是目前为止所发现的红细胞血型系中最为复杂的一个血型系。至今已发现的抗原 40 多个 , 但涉及临床问题的主要是 5 个抗原 , 即 C 、 c 、 D 、 E 、 e 及其相应的特异性抗体。 目前输血界普遍认为凡带有 D 抗原者 , 称为阳阳性 , 不带 D 抗原者称为 Rh 阴性。但是从输血免疫及血型血清学角度来看 , 只有 cedee 才是真正的 Rh 阴性者。
3、2.m 血型检查法一般情况下 ,Rh 血型鉴定中只进行 Rh(D) 定型。遇有特殊情况时才进行 Rh 血型系中 5 个抗原的定型。现售的 Rh(D) 抗血清大多为单克隆 IgM 型或 IgMdgG 型。方法 :取小试管 1 支 , 用笔标记好后 , 加入 mI 抗 D 血清 1 滴 , 若为单克隆的 IgM 型或 IgMdgG抗血清 , 加 2%-5% 受检者红细胞盐水悬液 1 漓 , 混匀 ,3000r/min 离心 15 秒 , 肉眼观察凝集度。若为 IgG 型血清 , 需加做 2% 受检者红细胞及菠萝酶液各 1 滴 , 混匀 , 置 37 水浴 30 分钟 , 30 r/min 离心 1
4、5 秒 , 肉眼观察凝集度。同时做阴、阳对照。结果判断 :阳性对照管凝集 ; 阴性对照管不凝集时 , 受检管凝集即表示受检红细胞含有相应抗原 , 不凝集则表示不含有相应抗原。3.RhD 阴性确认试验 取 3 支试管做号标记 , 加三个批号单克隆 IgG 型抗 D 血清一滴 , 再加 2%-5% 受检者 RBC悬液 1 漓 ,37 水浴 3Omin, 用生理盐水洗涤三次 , 加多价抗人球蛋白 1 滴 ,3000r/min 离心 15 秒 , 肉眼观察凝集度 , 若都不凝 , 为 Rho(D) 阴性 , 若有一试管内出现凝集 , 为 DU 型 , 或 Rho(D) 缺失型。实验二交叉自己血试验目的
5、要求 :掌握交叉配血试验的原理 熟悉交叉配血试验的操作一、交叉配血试验的原理及临床意义 :交叉配血试验也称配合性试验 , 其目的是保证安全输血。此试验是检查不配合性 , 使献血员 与受血者 ( 病人 ) 的血液间没有可测的不相配合的抗原 -抗体成分。配血试验阴性 , 输血后患 者的血清不会与献血员的红细胞发生反应。即使已知患者和献血员的 ABO 及阳 1D 血型相同 , 配 合性试验也是必要的。因为除了 ABO 、 Rh(D) 外还有其他红细胞血型系统存在。尽管患者的 ABO 、 Rh 血型与献血员配合 , 仍有可能含有其他红细胞血型的抗体 , 受血者仍有可能与献血员 的之间发生严重输血反应。
6、1. 交叉配血试验通常包括 :(1) 受血者血清对供血者红细胞的主侧配血。(2) 受血者的红细胞对供血者血清的次侧配血。(3) 受血者的红细胞对受血者血清为自身对照。交叉配血试验主要有三种方法 :(1) 盐水介质交叉配血。(2) 酶介质交叉配血。(3) 抗球蛋白介质交叉配血。2. 交叉配血试验的操作主侧 : 取受血者血清 1-2 滴 + 供血员 2-5% 红细胞盐水悬液 1 滴次侧 : 取受血者 2-5% 红细胞盐水悬液 1 滴 + 供血员血清 1-2 滴(1) 盐水介质交叉配血方法 : 主、次侧试管各离心 3 o 转 /min 、 15 秒 , 观察结果。意义 : 只能检出如 ABO 、 M
7、N 、 hwis 等 IgM 抗体(2) 酶介质交叉配血。原理 : 蛋白酶能破坏红细胞表面的唾液酸 , 降低表面电荷 , 使红细胞间距离缩短。方法 : 主、次侧试管中各加 0.5% 菠萝酶置 37 水浴 30 分钟后 ,3 or/min 离心 15 秒 , 观察结果。意义 : 能检出 Rh 等 IgG 抗体(3) 抗球蛋白介质交叉配血。原理与意义 : 见抗人球蛋白试验方法 : 主、次侧试管各置 37 水浴 30 分钟后 , 用 0.9% 生理盐水洗涤 3-4 次 ( 每次离心3 or/min 、 1 分钟 , 管口盐水要吸干 ), 末次洗涤后 , 将上清液全部吸出 , 立即加入 1-2 滴抗
8、球蛋白血清 , 昆匀 , 离心 3 or/min 、 15 秒 , 肉眼及显微镜下观察结果。实验三抗人球蛋白试验目的要求 :掌握直接、间接抗人球蛋白试验的原理 熟悉直接、间接抗人球蛋白试验的操作了解直接、间接抗人球蛋白试验的临床应用一、抗人球蛋白试验的原理(1) 倘若用人血清内提纯的球蛋白给动物 ( 如兔和山羊 ) 注射 , 动物对外来的蛋白质将会产生抗体 , 即抗人球蛋白。(2) 抗人球蛋白血清 , 在适当处理后 , 将会与人球蛋白发生特异性反应。如果球蛋白分子 , 或抗体或补体 , 附着于红细胞膜上 , 抗球蛋白血清将会与球蛋白结合。因为球蛋白附着于红细胞 上 , 抗球蛋白血清与球蛋白分子
9、的结合就引起红细胞凝集。反之 , 将不会被凝集。抗人球蛋白技 术用于检测已在体内被致敏的红细胞称之为直接抗球蛋白试验 ; 检测在体外致敏的红细胞称为间 接抗球蛋白试验。前者洗涤后的患者红细胞可直接进行抗人球蛋白血清检查。后者用于证实体外 被红细胞的致敏。含有抗体的血清与红细胞一起孵育 , 然后用生理盐水洗涤红细胞以除去未结合 到红细胞上多余的抗体。倘若加入抗人球蛋白血清导致的红细胞凝集 , 由此可证明是红细胞表面 具有与血清中的抗体相同特异性的表面抗原。二、操作1. 直接抗球蛋白试验操作意义 : 检查受检红细胞是否在体内已被抗体或补体致敏 , 用于新生儿溶血病 , 溶血性输血反应 , 自身免疫
10、溶血性贫血 , 药物诱导溶血性贫血等的检查。(1) 取一试管放一滴受检者血液配成 2-5% 红细胞悬液。用生理盐水洗涤 3-4 次 , 末次洗 涤后 , 将上清液全部吸出 , 立即加入 1-2 滴多价抗人球蛋白血清 (IgG+C3), 混匀。 (3000 转 / min 离心 15 秒 ), 持一定的角度轻轻地摇动试管直到松动试管底细胞。倘若观察到均匀的细胞悬 液为阴性 ; 有凝集物为阳性。(2) 用 IgG 致敏细胞 ( 抗 D 血清 + 阳阳性细胞 ,37 水浴 30 分钟 , 洗三次配成 2-5% 红细胞盐水悬液 ) 作为阳性对照 , 阴性对照用正常人 AB 血清与正常人 。 型红细胞反
11、应。(3) 对于判定为阳性的受检者 , 应用抗单价 IgG 或抗 C3 血清替代多余抗人球蛋白血清 , 重复 (1) 试验。区分是抗 IgG 阳性或抗 C3 所致。(4) 抗 IgG 阳性对照同 (2) 、抗 C3 阳性对照细胞 ( 一份 ACD 抗凝血 + 九份 10% 蕉糖 , 37 15 分钟 , 洗三次 ,37 水浴 30 分钟 , 配成 2-5% 红细胞悬液 ) 阴性对照用正常人 。 型 红细胞。2. 间接抗球蛋白试验意义 : 检查受检者血清中有否有红细胞的不规则抗体 , 适用于抗体筛查和鉴定及交叉配合试验等。(1) 按下表加入试剂反应物被检管阳性对照阴性对照 血清(被检或已知)2滴
12、 2-5%红细胞(被检或已知)1滴 5%D阳性细胞l滴1滴 IgG抗D血清2漓 AB型血清2滴 混匀,直37水浴半小时每管用充分的盐水至少洗涤三次。 未次离心后必须尽量弃去上清液。 抗球蛋白血清2滴2滴2滴(2) 上述试管中血清于红细胞混匀 , 离心 (3 0 转 /min 15 秒 ), 倘若阳性对照管呈现凝 集 , 阴性对照管呈现不凝集 , 受检管出现凝集为阳性 , 不凝集则为阴性。临床输血学实验记录标本号 姓名 性别 年龄 民族 科室 病区 床号 住院号 临床诊断 检测目的 收到日期 一、 ABO 定型抗A抗A1抗B抗A,BAcBcOc二、 RH 定型及其它定型抗D抗C抗c抗E抗E三、直接抗人球蛋白试验DAT抗IgG抗C3(-)(+)四、抗体筛选和鉴定 23456789lO11自身C五、其它发现六、结果实验学员 日 期 临床输血学免疫血液学检查报告实验室编号 姓名 性别 年龄 民族 科室 病区 床号 住院号 临床诊断 检测目的 收到日期 血 型ABO 血型 Rho(D) 其它血型 直接抗人球蛋白试验 血清检查发现
