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1、液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解不能不看的精髓_.txt6生活,就是面对现实微笑,就是越过障碍注视将来;生活,就是用心灵之剪,在人生之路上裁出叶绿的枝头；生活，就是面对困惑或黑暗时,灵魂深处燃起豆大却明亮且微笑的灯展。7过去与将来,都离自己很遥远,核心是抓住目前,抓住目前。液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解不能不看的精髓液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB5029-，糖精钠的检测参照GB/T509.28-，即可开展实验。苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常用的检测项目,但是要得到一种精
2、确可靠的成果,也存在一定的难度，许多新手常浮现因对措施理解发生偏差而检测出错的事故。笔者根据自己近年该方面工作的实际经验出发,以苯甲酸、山梨酸为着重点,从样品前解决、检测仪器的选择、超标时的判断等几种易出问题的方面，进行了具体的论述。2 样品前解决的注意事项GB/00.28-和B/509.29-在文字构造上有缺陷,在波及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时,只讲述了液体样品的前解决措施，没有波及对固体样品的前解决。食品样品往往具有大量的油脂、蛋白质,对提取极为不利；如解决不干净也会污染色谱柱,影响检测工作。此类样品解决的核心在于如何找到一种较抱负的沉淀剂,尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质,且不
3、影响待测物组分的回收率。BT009-使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白,对于蛋白质含量较低的食品尚可,对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不抱负。如用10钨酸钠溶液作为沉淀剂,效果好些;如用10亚铁氰化钾溶液和醋酸锌溶液则效果更抱负（这是笔者目前用过最抱负的沉淀剂)。具体操作环节如下：取一定量样品,捣碎，运用四分法原理称取样品5.0 克于l比色管中，加水2ml，浸泡、振荡均匀,加入氢氧化钠溶液(1mol/L）1ml,加入.5mL1%亚铁氰化钾溶液,.mL 20乙酸锌溶液,定容，振荡使其充足混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物， 初滤液过04m微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品解决液和原则有溶液各
4、进样u测定。用这种措施简朴易行,接触有机试剂少,反复性和回收率都令人满意；缺陷是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。3 检测仪器的选择虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要复杂,但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。因素如下:.1 液相色谱法所用的样品解决措施远比气相色谱法简朴,且不需使用有机试剂。特别对于高油脂样品(如月饼)若采用碱化-排油-酸化-提取-挥干溶解等环节,再上气相色谱仪检测,工作量大，试剂毒性也大，且成果由于解决环节太多而难以保证精确。3 用液相色谱法还可同步完毕糖精钠项目的检测,而气相色谱法只能做苯甲酸、山梨酸的检测。3.3 液相色谱仪所用的紫外检测器比气相色谱仪的氢火焰
5、检测器敏捷，可进行更低含量的检测。如用二极管阵列检测器，还可辅助定性，这更是气相色谱氢火焰检测器不可比拟的。4选用气相色谱仪时的注意事项GT0.2所用的气相色谱柱为 5%DES磷酸固定液的6080目 Crmoso WW，。这种柱有性能稳定、反复性好、保存时间稳定的长处,但同步也有稳定期间较长的缺陷。该柱的合用的样品提取溶剂为石油醚或乙醚,如果用甲醇或乙醇,则溶剂峰拖尾效应较大，对山梨酸的测定有影响。如用毛细管柱，能获得更好的峰形和敏捷度,但其稳定性及特异性不如填充柱。一般可用非极性毛细管柱，0530内径，10-15m长度。色谱条件也许需用程序升温。在气相色谱仪上的出峰顺序为先出山梨酸，后出苯甲
6、酸。糖精钠不能直接用气相色谱进行检测,必须衍生化后才干汽化进样。5选用液相色谱仪的注意事项按照GB/T5009.29,流动相应为5：95的甲醇：.02M醋酸铵溶液，但是这个比例仅是个参照值,我们在工作中应根据实际状况进行调节。为什么用甲醇溶液?甲醇有两个作用,(1)防腐,液相色谱柱最怕流动相长菌,特别霉菌。甲醇可使蛋白质变性,有杀菌作用。（2)调节流动相极性,这是最重要的一点。甲醇在溶液中比例的较小变化都会使苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保存时间发生明显的变化，因此可以通过变化流动相中甲醇含量，以调节这几种组分的出峰和分离，以得到较抱负的色谱图。5：9是一种通用的比例，如减少甲醇含量，苯甲酸、山梨酸
7、、糖精钠的出峰时间变慢,扩散效应增大，峰形较差,但这三组分的分离状况较好。如增长甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精钠的出峰时间提前,扩散效应较小,峰形锋利,但这三组分的分离状况也许受影响,产生重叠。在选择条件时,只能通过实验手段,如配制3:97，4:96，:5,6:96,：9的流动相,综合考虑分离效果和分离时间选择最佳比例。不同柱的最适比例不同，举例来说，色谱科公司的液相柱最适比例为4：，而岛津公司液相柱的最佳比例为7:93。就是同一根柱，一年前和一年后的极性也会有变化，需调节溶液配比。为什么使用0.02M醋酸铵溶液?加入醋酸铵是为了调节离子强度,使待测物的峰形不致于变坏。如果单独检测苯甲酸和糖精
8、钠，加不加醋酸铵没有什么关系,都可以得到较好的峰形;但是检测山梨酸时流动相一定要加醋酸铵,否则得不到一种完整的色谱峰,峰形呈破裂状。醋酸铵溶液浓度不需严格控制,01M、0.02M、004均可。苯甲酸、山梨酸、糖精钠在液相上的出峰顺序很有特点。在流动相5:5及如下比例时,顺序是苯甲酸、山梨酸、糖精钠（注意一下气相的出峰顺序)，逐渐增大甲醇含量,苯甲酸、山梨酸的出峰时间逐渐提前,而糖精钠是出峰时间迅速提前,随着甲醇比例的逐渐增大（15%30%）,原先在最后出峰的糖精钠集次和前面的山梨酸、山梨酸重叠,并位于最前面，其顺序变为糖精钠、苯甲酸、山梨酸。再提高甲醇浓度，顺序不变。用高甲醇比例条件(甲醇15
9、%以上)做出的三种原则物质色谱图峰形较好,出峰时间也较快，但做实际样品时干扰较大;因此建议尽量使用低甲醇比例条件(甲醇%左右）。6 苯甲酸、山梨酸超标时的判断苯甲酸、山梨酸超标的样品较多,由于它们往往牵涉到一批货品与否合格,因此责任重大。由于该措施定量较精确，因此遇到超标样品时应将精力集中于定性方面。犹如步有气相色谱仪和液相色谱仪,建议用这两种性质相差较大的仪器进行对照,如定量成果差不多，即可确认。如只有气相色谱仪，应运用其在填充柱保存时间稳定的特性,同步进五针原则液和五针样品液（注:峰面积应差不多,否则需对一方按比例稀释),如原则和样品液的保存时间相差时间超过 秒,可觉得不是。(如进针的技术
10、但是关,请不要做此实验）如用液相色谱仪，当检测器为二极管阵列检测器时，根据保存时间和紫外吸取图结合定性,当只有紫外检测器时,改检测波长为220nm,3nm,250nm,反复进原则和样品液,由原则和样品在不同波长的峰高比值看与否吻合。如有微生物检测手段,可加样品于有菌培养基中,观测有无抑菌现象，如无抑菌现象则无防腐剂。不是很推荐用双柱法,由于有时柱极性相差不大,反而会影响最后判断。7 糖精钠超标时的判断当检测糖精钠超标时，除了采用二极管阵列检测器或波长验证,还可以运用糖精钠的荧光特性,用荧光检测器进行验证。荧光条件是激发波长为7,荧光波长为nm。只有当用荧光检测器和用紫外检测器做出的定量成果相差
11、不多,才可以判断为是。尚有一种简朴粗糙、却也行之有效的验证措施,即感官法。糖精钠是一种甜味剂，用舌头可以感觉到它的甜味，如果含量超标,一定能尝出来。8原则溶液的配制贮存问题苯甲酸、山梨酸、糖精钠的原则溶液如用水、乙醇作基体，一般几种月后会严重降解，。如用甲醇溶解再放于冰箱冷冻层,可保持稳定一两年。因此推荐用甲醇作溶剂。在配制原则溶液时，初学者常犯的错误多为用甲醇溶解苯甲酸钠,用水溶解苯甲酸,晃了半天才发现怎么也不没溶解。应当用弱碱性水溶解苯甲酸钠、山梨酸钾，用甲醇溶解苯甲酸、山梨酸。9苯甲酸、山梨酸的应用范畴一方面应注意到,并不是所有食品都需要加入防腐剂,只有那些富含营养物质，且需要长时间暴露
12、于空气的才有这样的需要,否则对厂家来说会增长不必要的成本。酱油、酱料、咸菜、浓缩果汁等由于开封后不也许短期内吃完，月饼等需在货架上摆放,如不加防腐剂不久会发霉变质，有添加防腐剂的必要。而利乐装或易拉罐装的饮料由于不久可以食用完毕,即在细菌大量繁殖前己被消化了,因而没有添加的必要。苯甲酸、山梨酸如果要起到防腐的作用，含量就不能太低。如果我们检测样品时只有几种p的浓度,有也许是从原料中带来的或由其他添加剂转化来的，而不是厂家出于防腐目的加入的。苯甲酸、山梨酸也只是防腐剂中的两种。并不是所有需要加入防腐剂的食品都会添加苯甲酸、山梨酸,有也许使用防霉剂或其他种类的防腐剂，或自行规定需冷藏（如某些月饼）。因此有些食品检测不出也属正常。此外,我们应当比较清晰地理解苯甲酸与苯甲酸钠、山梨酸与山梨酸钾之间的关系。在食品中添加防腐剂一般以苯甲酸钠、山梨酸钾形式加入,它们不易汽化,易溶于水,但不溶于甲醇等有机试剂;而苯甲酸、山梨酸易汽化,易溶于有机试剂，但是几乎不溶于水。检测时要注意有机酸及其盐类之间的转换。
