《高效液相色谱柱效能的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱柱效能的测定（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理2. 学习高效液相色谱仪的使用3. 学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相 和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法 及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：n = 5.54式中：tR为组分的保留时间yi/2为色谱峰的半峰宽度Y为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1. 仪器1： KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）2. 5p l微量进样器3. 试剂：甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、混合液四、实
2、验条件1. 色谱柱1长15cm，内径4.6mm，装填10pm的C-18烷基键合固定相2. 流动相 甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min3. 紫外光度检测器波长254nm，灵敏度0.084. 进样量5ul五、实验步骤1. 根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态， 待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。2. 分别吸取5p l甲酯、混合液，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文 件名。3. 用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。六、数据记录及处理单位：min单液类别保留时间起点时间落点时间
3、理论塔板数甲酯5.5435.5075.58092249.500乙酯5.3505.1975.970766.423混合液类别保留时间起点时间落点时间12.6672.5732.7373.0672.7453.2283.4533.3353.7223.8523.7224.1504.5234.3654.6405.5675.3805.69322.6872.5972.7703.0672.7773.1853.4033.1853.6253.7323.6253.9834.2774.0554.6405.0974.9225.693混合液各理论塔板数计算结果如下表:1242313859.786459041273.77957.06129617384328.2855.235061699
