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1、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳一、制胶1、玻璃板的处理（1）选择配套的玻璃板，洗涤剂清洗，清水冲刷干净，75%的乙醇擦洗，无水乙醇擦洗。（2）Marker板的内表面（接胶面）均匀的涂上剥离硅烷，另一块板的内表面均匀的涂上亲和硅烷（BS,已分装好于-20C保存，此后不能触摸玻璃板的内表面，因为玻璃板特别易碎，玻璃板处理的过程中要特别小心，以免弄碎玻璃板。）。2、固定玻璃板将两个压条置于长玻璃板的左右两侧，Marker板压于其上，使两玻璃板，压条与玻璃板（Marker板的突出部分与玻璃板对齐）对齐，在玻璃板的两侧分别夹上夹子。封上胶带。（封胶带时，尽量避免胶带封上之后又扯下来，否则容易漏胶；封上胶带之后，
2、在玻璃板的上口处贴上一块胶带，便于倒胶。）3、灌制胶板（1）用夹子夹紧胶板的左右两侧，两侧对齐的夹子松紧要差不多，下面的夹子应稍紧，一般每侧夹46个夹子。（2）在烧杯中倒入约75ml的6%的丙烯酰胺变性胶，加入500700M的Aps，混匀，倒入玻璃板中（倒胶时要匀速，不能断流，否则有气泡。），倒插梳子，并夹上两个夹子。待胶凝固（约90min）。二、电泳1、预电泳（1）拔出梳子，撤去夹子胶带，清洗胶板，去除废胶。（2）将胶板安装预电泳槽中（凹面朝上，Marker板朝内。）。（3）预电泳。上下两槽均倒上电泳缓冲液，接上电源（红电极接红色插孔，黑电极接黑色插孔），1200V，预跑30min。2、样品
3、制备PCR扩增产物和上样缓冲液以1:1的比例混匀，95C变性5min,结束后迅速置于冰上骤冷。3、上样及电泳（1）用洗耳球吹打胶面,以去除预电泳扩散出来的尿素（气泡）。（2）插入梳子,齿稍进入胶面即可。（3）点样（64孔梳子加样3,96孔加2山）。（4）电泳。三、银染1、取下胶板,清水冲洗后,取下Marker板。2、固定。将胶放入固定液中,固定2040min.（此步及以下步骤均在摇床上操作）3、水洗。将胶从固定液中取出，控水1020S,放入去离子水中清洗34min,重复3次。固定液留着备用。4、染色。将胶在染色液中染色30min。5、显色。将胶在去离子水中清洗5S后，在显色液中显色织条带出现（
4、显色时间过长，条带回便模糊）。倒入固定液,固定35min。6、去离子水冲洗两次,每次2min。7、室温下晾干。所用试剂10XTBE成分重量（体积）Tris-Base108g硼酸55gEDTA(0.5M)40ml定容至1LAps(10%m/V)成分重量（体积）过硫酸铵1gddH2O10ml每管0.5ml分装，-20C保存。剥离硅烷成分体积剥离硅烷6ml无水乙醇4ml亲和硅烷（BS）成分体积亲和硅烷3山冰醋酸5山乙醇（95%）im丙烯酰胺溶液（45%m/V）成分重量（体积）丙烯酰胺N,N-亚甲双丙烯酰胺ddH2O434g16g600ml待固体溶解之后用ddH2O定容至1L，将溶液用硝酸纤维素滤膜（
5、0.45m孔径）过滤，装在棕色瓶子中于4C保存。丙烯酰胺变性胶（6%）成分体积（6%）体积（8%）丙烯酰胺溶液（45%）133ml178ml10XTBE10ml100mlddH2O414ml369mlTEMED500d500dVrea（尿素）420g420g定容至1L1L硝酸纤维素滤膜（0.45m孔径）过滤后于4C保存。Loadingbuffer成分重量（体积）甲酰胺20mlEDTA(0.5M)400d二甲苯氰50mg溴酚蓝50mg每管装1ml固定/终止液成分体积冰醋酸100mlddH2O900ml染色液成分重量（体积）AgNO31gddH2O1000ml甲醛（37%）1.5ml（使用前加）显色液成分重量（体积）Na2CO330gNa2S2O3(10mg/ml)500ulddH2O1000ml甲醛（37%）1.5ml（使用前加）使用前（未加甲醛）于4C预冷。
